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Técnicas de aislamiento de Bacterias Aerobias.. CLM

Los métodos más comunes para el aislamiento de bacterias aerobias son: estría cruzada y la técnica de diluciones. La primera es una técnica cualitativa muy sencilla y la segunda es una técnica cualitativa y cuantitativa que nos permite conocer el tipo y el numero de microorganismos en una muestra es un método más laborioso.En ambas técnicas los medios de cultivo utilizados y las condiciones de incubación dependen del tipo de microorganismo que se quiere aislar.
La técnica de diluciones permite cuantificar con exactitud el numero de microorganismos o unidades formadoras de colonias (UFC) en una muestra. Para ello debe seleccionarse aquella dilución en la que se presenten entre 30 y 300 colonias y multiplicarpor la inversa de la dilución tomando en cuenta la alícuota depositada..
UFC/ ml o g de muestra = No. De colonias X 1/dil X 1/alícuota


Se recomienda que la cuantificación de microorganismos se realice sembrando por duplicado y para los cálculos hacer un promedio del número de colonias encontradas en la dilución seleccionada.

Objetivo: El alumno aislara bacterias por latécnica de diluciones .

Material
11 tubos de ensayo. 1 gradilla
Pipeta graduada de 1 ml estéril. 1 asa bacteriológica.
Pipeta de 10 ml estériles.
Matraz Erlenmeyer de 250 ml con 100 ml de agua estéril.
Varilla de vidrio acodada. Nota: Materialpor equipo (*)
1 Caja de Petri estéril. * Material por grupo(1*)
Etanol. *
Algodón. * Marcador indeleble.*
1 pliego de papel bond. 1* 1 lata vacía del tamaño de una leche Nido . 1*

Método.
1. Adicionar 1 ml de agua destilada
2. Marcardel 1 al 10 una serie de 10 los tubos.
3. Adicional a cada tubo 4.5 ml de agua destilada estéril en condiciones de esterilidad.
4. Agregar al primer tubo con el ml de agua 1-4 colonia de bacterias. La suspensión debe quedar ligeramente turbia.
5. Agregar al primer tubo de la serie 0.5 ml de la suspensión anterior.
6. Realizar diluciones decimales de cada tubo. Tabla 1.
a)homogenizar la suspensión de cada tubo antes de transferir el volumen al siguiente tubo..




tabla 1

Número de tubo Agua ml Dilución.
1. 0.5 ml de suspensión 4.5 10 -1
2. . 0.5 ml de suspensión del tubo1 4.5 10 -2
3. . 0.5 ml de suspensión del tubo 2 4.5 10 -3
4. . 0.5 ml de suspensión del tubo 3 4.5 10 -4
5. . 0.5 ml de suspensión del tubo 4 4.5 10 -5
6. . 0.5 ml de suspensióndel tubo 5 4.5 10 -6
7. . 0.5 ml de suspensión del tubo 6 4.5 10 -7
8. . 0.5 ml de suspensión del tubo 7 4.5 10 -8
9. . 0.5 ml de suspensión del tubo 8 4.5 10 -9
10. . 0.5 ml de suspensión del tubo 9 4.5 10 -10



7. Colocar 0.1 ,l de las diluciones de tubo 9 y 10 en diferente caja con medio de cultivo.
8. En una caja de Petri con alcohol al 70 % sumergir l varilla acodadaesterilizar al pasarla por la lámpara de alcohol.
9. Esparcir con varilla acodada en la superficie del medio.
Incubar a 37 C durante 24-48 horaTécnicas de aislamiento de Bacterias
Aerobias.

Resultados.

Cual es la dilución acumulada de las tubos 9 y 10 que son los que utilizo en sus medios de cultivo.
Cuantas UFC crecieron en cada dilución.
Solo creció un tipo de colonia en lasdiluciones y si no es así cual es su explicación.
Realice la descripción de la morfología colonial.
En que dilución crecieron menos colonias esto es lógico. Por que. Explique.

Calcular el numero de UFC por ml de cada dilación utilizada.

Conclusiones

Bibliografía.







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