Metodos De Cultivos

14-08-2012

4. Métodos de cultivo, aislamiento y
conservación.

Cultivo
• Proceso de laboratorio donde se induce
el
crecimiento
in
vitro
de
los
microorganismos.
• Para conseguir la multiplicación de
agentes
patógenos
en
sistemas
artificiales es necesario aportar los
elementos nutritivos mínimos suficientes,
así como las condiciones fisicoquímicas
óptimas para su desarrollo.• Para ello se utilizan los medios de cultivo.

Condiciones de un medio de cultivo
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados
2- Consistencia adecuada del medio

3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y
otros gases
4- Condiciones adecuadas de humedad
5- Luz ambiental
6- pH

7- Temperatura
8- Esterilidad del medio

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Requerimientos
Absolutos

AdicionalesAmbientales

- Fuente de Energía

- V itaminas

- T emperatura

- Fuente de Carbono

- Factores de crecimiento

- A tmósfera

- Fuente de Nitrógeno

- A á esenciales

- Humedad

- Sales

- Salinidad

- A gua

- pH

Compuestos y reactivos químico
usados en medios de cultivo
• Hidrolizados de proteínas : peptonas, i nfusión de
carne, triptonas y caseína.
• La proteínas sondivididas en a. ác . y péptidos
utilizados como fuente de C y N.
• Carbohidratos: una v ariedad de disacáridos
(lactosa, sacarosa,y maltosa), hexosas (dextrosa) y
pentosas (xilosa) son i ncluidas.
• Proporcionar una fuente de C para energía y servir
como sustrato para reacciones bioquímicas para la
i dentificación de M O desconocidos.

• Tampones: Se utilizan fosfatos de Na o K.
•Proporcionan un pH estable para el óptimo
crecimiento de M O y un pH de referencia estándar
para aquellos medios en los que las reacciones
ácidas o alcalinas son usadas para i dentificar M O.
• Enriquecedores:
sangre,
suero,
suplementos
v itamínicos y extracto de levadura.
• Los suplementos son agregados al medio para
recuperar M O fastidiosos.

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• Inhibidores: diferentescompuestos se pueden usar
para inhibir el desarrollo de MO no deseados
(medio selectivo).
–
–
–
–

Colorantes de anilina (verde brillante, eosina).
Metales pesados (bismuto).
Compuestos químicos (azida, selenito, fenil -etil-alcohol).
Agentes antimicrobianos (neomicina, colistín, ampicilina,
v ancomicina, cloranfenicol).

• Indicadores de pH: Los más usados fucsina, azul de
metileno,rojo neutro, rojo fenol y púrpura de
bromocresol. Para medir cambios de pH en el
medio resultante del metabolismo bacteriano de
los sustratos dados.
• Indicadores misceláneos: pueden i ncluirse otros
i ndicadores para detectar productos e specíficos
(iones férricos y ferrosos para la detección de
sulfuro de hidrógeno)

I ndicadores de pH

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• Compuestos químicosmisceláneos : El agar, un
extracto gelatinoso de las algas rojas es
adicionado al medio en concentraciones v ariables
como un agente gelificante.

Ejemplos
tipo

Inhibidor o indicador

proposito

Agar MacConkey

medio

S,D

Sales biliares, cristal
violeta, lactosa, rojo
neutro

Selecciona entrobacteria y otros
bacilos Gram -. Inhiben la mayoría
de los Gram +. Diferencian losbacilos Gram – fermentadores de
los no fermentadores.

Caldo selenito F

E

Sales de selenio

Enriquecimiento para Salmonella
spp

Agar sangre

E, D

Glóbulos rojos de
cordero

Permite el desarrollo de una amplia
gama de bacterias y evidenciar el
tipo de hemólisis que estas
producen.

S: selectivo; D: diferencial; E: enriquecido

Medios de cultivo
• Uso
• Clasificación4

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Uso
• Objetivo es aislar y cultivar los
microorganismos (MO) (bacterias)
causantes de una infección, para
llegar a un diagnóstico certero y un
tratamiento adecuado

Clasificación
• Físico
• Componentes

• Función

Físico
• Sólidos

1,5 – 2,0 % agar

• Semi sólidos

0,5 % agar

• Líquidos

sin agar

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M edios sólidos

M edios...