Metodos de separaciones cromatograficas.

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INSTITUTO TECNOLOGICO DE MORELIA
“José María Morelos y Pavón”
Ing. Bioquímica.
Química Analítica II
“Métodos de separaciones cromatográficas”

Alumnos:
GUZMÁN VILLALOBOS NANTLYSARAHI.

Profesor:
Dr. ELIEL RAFAEL ROMERO GARCÍA.

1 de Junio 2010. Morelia, Mich.
Contenido
MARCO TEORICO: 1
INTRODUCCIÓN: 2
RESUMEN: 3
SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS: 9
1.- CROMATOGRAFÍALÍQUIDO-LÍQUIDO (CLL). 16
2.- CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDO-FASE UNIDA QUÍMICAMENTE. 19
3.- CROMATOGRAFÍA LÍQUIDO-SÓLIDO (CLS). 25
4.- CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO. 28
5.- CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION POR TAMAÑO. 39
Cromatografía de gases (GC). 43
1.- CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO (GLC). 45
2.- CROMATOGRAFÍA DE GAS-FASE QUÍMICAMENTE UNIDO. 49
3.- CROMATOGRAFÍA DE GAS- SOLIDO. 52
CROMATOGRAFÍA DE FLUIDOSSUPERCRITICOS. 59
ELECTROFORESIS. 66
1.- Electroforesis de proteínas. 70
2.- Electroforesis de ácidos nucleicos. 73
BIBLIOGRAFÍA: 86

MARCO TEORICO:
Desde el siglo pasado las separaciones analíticas se llevaban a cabo por métodos clásicos como son la precipitación, destilación y extracción. En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó un experimento que condujo al descubrimiento de lo que hoyconocemos como cromatografía. Tswett colocó un extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter, observó que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través de la columna a diferentes velocidades.

Un rasgo característico de la cromatografía es la presencia de dos fases;dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de él (fase móvil).
En el experimento de Tswett, la separación de los pigmentos vegetales se logró gracias a que cada uno de ellos tenía una afinidad diferente por las fases.
En general, los componentes más afines a la fase estacionaria avanzan lentamente mientrasque los más afines a la fase móvil se mueven con mayor rapidez.
INTRODUCCIÓN:
Este trabajo se centrará en el estudio de los métodos de separación por cromatografía, la cual tiene una gran aplicación en la actualidad, sobre todo en el campo de la biología molecular, biotecnología, bioquímica, entre otras.
Actualmente las separaciones analíticas se realizan fundamentalmente por cromatografía.La cual comprende un conjunto importante y diverso de métodos que permiten a los científicos separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios. Se pueden separar moléculas en función de sus cargas, tamaños y masas moleculares. También a través de la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, etc. Lacromatografía no solo permite la separación de los componentes de una mezcla, sino también su identificación y cuantificación.
Los métodos cromatográficos se pueden clasificar según la forma en que la fase móvil y la fase estacionaria se pongan en contacto. Así en la cromatografía de columna, un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a través de la cual se hace pasar la fase móvil. En la cromatografía enplano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o a los intersticios de un papel; en este caso la fase móvil se desplaza a través de la fase estacionaria por capilaridad o por gravedad.
La clave de la separación en cromatografía es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribución).
RESUMEN:
Los crecientesesfuerzos por conocer más sobre la composición y función de las proteínas han obligado a los científicos a buscar técnicas, cada vez, más precisas. Para elegir una técnica de separación, además de tener en cuenta los criterios económicos y de accesibilidad, hay que atender a dos tipos de consideraciones: una tiene que ver con las propiedades físicas y estructurales de las moléculas que se...
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