Microbioloìa

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
PROGRAMA MICROBIOLOGÍA Y BIOANÁLISIS

PROYECTO CURRICULAR BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO - 4509252
COLORACIÓN DE GRAM
Astrid V. Cienfuegos, MSc
La tinción de Gram es utilizada para clasificar bacterias con base en su morfología celular, tamaño, y apetencia tintorial; esta es una
prueba crítica para el diagnóstico presuntivo de agentesinfecciosos y sirve además para evaluar la calidad de la muestra. Esta tinción
fue desarrollada por Christian Gram en 1884; en el laboratorio se utiliza más comúnmente la modificación realizada por Hucker en
1921, debido que esta usa reactivos más estables y permite mejor diferenciación de los organismos. Adicionalmente se han realizado
otras modificaciones para anaerobios (Koppeloff) y para bacteriascon tinción gram-negativa débil (Legionella spp., Campylobacter
spp., Brucella spp., etc.) utilizando como colorante de contraste carbol fucsina o fucsina básica.
Las bacterias se tiñen como gram-positivas o gram-negativas con base en la diferencias en la composición de la pared celular y
arquitectura. Las bacterias gram-positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano y gran cantidad deácido teicóico que resisten la
decoloración con alcohol, y por tanto, retienen el colorante inicial apareciendo de un color violeta oscuro si su pared celular no está
dañada por el tiempo, por agentes antimicrobianos o por otros factores. Las bacterias gram-negativas tienen una sola capa de
peptidoglicano unida a una membrana externa formada por una bicapa asimétrica de lipopolisácaridofosfolipídico, estas dos
estructuras están separadas por proteínas. Durante la coloración, la membrana externa es dañada por el alcohol decolorante,
permitiendo que el complejo cristal violeta-yodo sea eliminado y reemplazado por el colorante de contraste, haciendo que las células
aparezcan de color rosa.
La interpretación de la tinción de Gram tiene en cuenta las características de tinción, el tamañocelular, forma y arreglo. Estas
características pueden estar influenciadas por varios factores, incluyendo el tiempo de cultivo, medio, atmósfera de incubación,
métodos de tinción y presencia de sustancias inhibitorias. Deben tenerse en cuenta consideraciones similares al interpretar las
tinciones de muestras clínicas, incluyendo la presencia de tipos celulares del hospedero presentes yfagocitosis
Reactivos
1. Metanol absoluto. Almacenado en botellas oscuras o contenedores plásticos
2. Violeta cristal
3. Iodo
4. Decolorantes
a. Lentos: etanol, 95%
b. Intermedios: alcohol-acetona
Mezcla 50:50
Combine en frascos oscuros de vidrio, colóquele fecha de expiración de 1 año y almacene a temperatura ambiente.
c. Rápido: Acetona (grado reactivo)
5. Colorante de contraste
a. Safraninab. Carbol fucsina
c. Fucsina básica (pH 0.8, 0.1 o 0.2%)
d. Safranina de Kopeloffs
Prepare grandes volúmenes y prepare las soluciones de trabajo cuando se necesiten (esto es más eficiente y asegura gran
uniformidad). Vacíe los reactivos en botellas pequeñas para uso diario; sin embargo, debe reemplazar las botellas pequeñas de
violeta cristal y del colorante de contraste mensualmente, paraevitar la formación de precipitado en las placas.

Indique el nombre del reactivo, fecha de preparación, fecha de uso, número de lote, fecha de expiración y condiciones de
almacenamiento de los frascos en el registro de trabajo. No es necesario marcar los frascos con esta información, sólo coloque el
nombre del reactivo, si la fecha de uso está claramente marcada en las soluciones stocks y losregistros.
Control de Calidad
A. Verifique la apariencia de los reactivos diariamente
a. Si el cristal violeta tiene precipitado o sedimento, filtre nuevamente antes de usar.
b. Cambie las soluciones de trabajo regularmente si no se gastan con el uso normal. La evaporación puede alterar la
efectividad de los reactivos
c. Limite el reuso de contenedores descartándolos mensualmente.
Nota:...