Microbiologia de aguas y arenas de playa

ANÁLISIS MICROBIOLOGICOS EN AGUAS NATURALES Y ARENAS DE PLAYAS

Biol. Jorge Luna Fontalvo

Determinación de Coliformes Totales y Termotolerantes.

Teniendo en cuenta los protocolos señalados por el APHA 98 (Standard Methods), se emplea para la determinación de Coliformes Totales y Termotolerantes en muestras de aguas la metodología, de tubos múltiples de fermentación serie de cinco tubos,Para poder detectar estos microorganismos en aguas de contacto primario y secundario se puede realizar la técnica de recuento indirecto por tubos múltiples de fermentación expresado en el Número Más Probable (NMP), esta es una técnica presuntiva basada en probabilidades estadísticas, la cual busca determinar la presencia de microorganismos indicadores como Coliformes y Coliformes termo tolerantes.A continuación se describe la marcha analítica para la determinación de los coliformes.

Pre enriquecimiento
• Realizar diluciones seriadas dependiendo la naturaleza de la muestra (Limpia, medio contaminada o residual)

Para aguas limpias se emplea las siguientes diluciones
10 ml para la primera dilución (100)
1 ml para la segunda dilución (10-1)
0.1 ml para tercera dilución (10-2)Para aguas contaminadas o moderadamente contaminadas
1 ml (1000μL) para la primera dilución (10-1)
0.1 ml (100μL) para la segunda dilución (10-2)
0.01 ml (10μL) para la tercera dilución (10-3)

Si se sospecha que la muestra esta muy contaminada se debe ampliar las diluciones, para esto se deben utilizar tubos de dilución con agua peptonada al 0.1% estéril.

Para aguas residuales se emplealo siguiente:
1. ml de la dilución 10-2 para la primera dilución (10-4)
01. ml de la dilución 10-2 para la segunda dilución (10-5)
0.1 ml de la dilución 10-4 para tercera dilución (10-6)
• En tres series de cinco tubos adicionar directamente de la muestra de agua las diluciones que correspondan según sea la naturaleza a cada uno de los tubos que contienen 10 mL de Caldo Lauryl sulfato.
•Incubar a 35° C por 48 Horas.
• Realice la lectura observando la presencia de turbidez y producción de gas en las campanas de Durham como positivos de la fase de preenriquecimiento.

Identificación de coliformes totales

• De los tubos positivos (Turbidez y producción de gas en la campana de Durham) del preenriquecimiento, sembrar dos (2) asadas en Caldo Brilla.
• Incubar por 24 horasa 35° C.
• Los tubos que arrojaron respuestas positivas (turbidez y producción de gas) se consideran como positivos para Coliformes totales.

Identificación de coliformes termo tolerantes

• Tome los tubos positivos del caldo Brilla de la prueba de Coliformes totales.
• Inocule con dos asadas a un tubo que contiene 10mL de caldo EC.
• Incube a 45°C por 24 horas.
• Realice la lecturaobservando la presencia de turbidez y producción de gas en las campanas de Durham.

Informe comparando con la tabla de Mac Grady a partir del número de tubos positivos para la determinación de Coliformes Totales y Coliformes Termo tolerantes.

Determinación de Coliformes en muestras de Arenas

A partir de la bolsa que contiene la muestra de arena, tomar 10 gramos y deposítelo en un frasco quecontiene 90 ml de agua peptonada al 0.1% estéril, esta dilución será llamada a la 10-1, y a partir de esta realizar las siguientes diluciones hasta 10-3.

Posteriormente aplicar la marcha analítica para la determinación de Coliformes anteriormente descrita.

Determinación de Enterococos Fecales (Enterococcus faecalis)

Para la determinación de los enterococos en muestras de aguas y arenasse emplea la técnica del Numero Mas Probable (NMP) ó el método de filtración por Membrana.
En este caso emplearemos la técnica de Filtración por Membrana, esta es más rápida y exacta que la del NMP, además es una técnica cuantitativa.

Colombia no posee Normatividad que establezca la concentración de enterococos fecales en muestras de aguas y arenas, por eso esta es una razón más por hacerla...