Microbiologia de alimentos

PRACTICA No. 1
RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESÓFILOS AEROBIOS EN AGUAS PURIFICADAS.

INTRODUCCIÓN

Cuando se pretende investigar el contenido de microorganismos vivos en un alimento la técnica más comúnmente utilizada es el recuento en placa. Esta técnica se aplica para un gran variedad de microorganismos y su funcionamiento consiste en contar las colonias que se desarrollan en el medio deselección después de cierto tiempo y temperatura de incubación presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo en la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación, algunas de ellas controlables, pero sujetas a la influencia de varios factores.

En realidad esta técnica pretende en poner en evidencia a todos los microorganismos presentes. La variedad deespecies y tipos diferenciales por sus distintas necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc. hacen que el número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente presente. No obstante, la ejecución de la técnica cuando se siguen fielmente las condiciones que se señalan para su desarrollo pueden llegar a ser lo bastantereproducibles para darle significado a los resultados que se obtengan.

OBJETIVO:
El alumno aprendera como se realiza el recuento total de microoganismos mesófilos aerobios en aguas purificadas.

HIPOTESIS

METODOLOGÍA

RECURSOS MATERIALES :

MATERIAL:

Utensilios estériles para la preparación de las muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas.

Pipetas bacteriológicas estérilesde 10 y 1 mL graduadas en 0.1 y 0.01 mL respectivamente.

Frascos de vidrio de boca angosta de 250 ml de capacidad con tapón de rosca conteniendo 99 o 90 mL , o tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca conteniendo 9 mL de solución buffer diluyente, en ambos casos ( 1% del volumen señalado después de la esterilización.

EQUIPOS:

Horno para esterilizar a 180°C.
Autoclave con termómetro omanómetro, probada con termómetro de máximas.
Baño María con termostato y termómetro.
Licuadora de 1 o 2 velocidades controladas por un reóstato con vasos metálicos estériles.
Balanza de una capacidad no mayor de 2,500 g y una sensibilidad de 0.1 g.
Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de
( 0.1°C.

REACTIVOS:

Solución buffer diluyente.
Agar Triptona Extracto de Levadura.Agar para Métodos Estándar

TECNICA:

a).- Distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que su inoculación, la adición de los medios de cultivo y su rotación se pueda realizar cómoda y libremente, marcar las cajas en sus tapas con los datos pertinentes previamente a su inoculación.
b).- Para la preparación y la dilución de la muestra seguir las condiciones señaladas.c).- Practicar las diluciones decimales que se estimen convenientes .

d).- Transferir un ml de la muestra y de cada una de las diluciones a cajas Petri estériles evitando todo tipo de contaminación durante la maniobra y aplicando la punta de la pipeta al fondo de la caja mientras escurre el líquido.

e).- Agregar 12 a 15 mL del medio de cultivo, fundido y mantenido a una temperatura de 45 -48°C en un baño de agua. Mezclarlo con la muestra (6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás hacia adelante) sobre una superficie lisa y horizontal y cuidando que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar.

f).- El tiempo transcurrido desde el movimiento que la muestra se incorpora al diluyente, hastaque finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no excederá de 20 minutos.

g).-Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia bajo) durante el tiempo y a la temperatura que se requiera, según el tipo de alimento de que se trate.

h).-Seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 30 a 300 colonias, pues es en ellas donde será el menor error en el recuento....