Microbiologia de los alimentos

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS+. Practica 1 Método de cuenta total estándar de microorganismos mesófilos aerobios en alimentos y método del número más probable para el análisis de coliformes fecales en alimentos.
Objetivo. El alumno cuantificara la contaminación microbiana existente en un alimento y la contaminación de origen fecal utilizando las técnicas más comunes. Material y equipo. Tijeras.Espátulas. Matraces erlenmeyer de 1000 ml. Pipetas de 0.1 y 10 ml con graduación de 0.1 ml. Cajas petri de vidrio de 100x15 mm. Jeringa no estéril. Tubos de cultivo con tapón de rosca de 16x150 mm. Frascos de dilución de 100 ml, con tapón de rosca. Probetas de 100 y 500 ml. Mechero bunsen. Parrilla de calentamiento y agitación. Balanza granataria, Autoclave. Licuadora con vaso de vidrio. Microscopioóptico. Gradilla metálica. Vidrios de reloj. Tubos de cultivo de 16x150 mm. Campanas de Durham. Tubos de cultivo de 13x150 mm. Vaso de precipitado de 100,250 y1000 ml. Barra de agitación magnética. Piseta. Porta-objetos. Mechero fisher.
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Balanza analítica. Incubadora. Refrigerador. Cuentacolonias.

Dra. Keiko Shirai

Medios de cultivo y reactivos. Agar de cuenta estándar. Caldo EC. Agarcitrato de Simmons. Agar eosina azul de metileno EMB. KOH. Reactivo de Kovacs. Fenol. Agua destilada. Masking tape. Gasa. Caldo lauril sulfato. Caldo RM-VP. Agar sulfuro indol movilidad SIM. Agar rojo neutro-cristal violeta-bilis RVB. Rojo de metileno. α-naftol. NaCl. Aceite de inmersión. Algodón. Papel de estraza. Papel de seda. Procedimiento. 1.-Preparación de la muestra. 1.1 Pesar 10g de alimentoen condiciones asépticas. Transferir a un vaso de licuadora estéril, agregar 90 ml de solución salina estéril y licuar por un minuto. Si el alimento no necesita licuarse pesar 10 g de producto o 10 ml directamente en un frasco de dilución de 90 ml de solución salina estéril y agitar vigorosamente para homogenizar la muestra. 1.2 Esta dilución corresponderá a 10-1 y a partir de ellas se harántantas diluciones como sea necesario (10-2, 10-3, etc.) 1.3 Sembrar placas de agar de cuenta estándar, inoculando 0.1 ml de cada dilución preparada extendiendo sobre la superficie como una varilla doblada estéril, incubar a 35°C por 24 o 48 h. II. Interpretación de los resultados de cuenta total estándar Completada la incubación seleccionar las placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contra elnúmero de colonias, multiplicando por el inverso de la dilución redondeando la cantidad a dos cifras. Reportar el número de colonias por gramo (ver las reglas anexas)

Regla para la cuenta de colonias. 2.1 Cuando solo una dilución tiene el rango apropiado, se deberán contar las colonias, multiplicando por el inverso de la dilución. 2.2 Cuando hay dos diluciones cuyo rango es el apropiado, sedeben contar las colonias de cada dilución y luego se promedian las cuentas de dos diluciones. 2.3 Cuando la dilución menor tenga menos de 30 colonias contar las colonias. 2.4 Cuando la dilución máxima tenga mas de 300 colonias, se deberá escoger un área de la placa donde la distribución colonial sea representativa, contando posteriormente las colonias multiplicando por el factor adecuado para obtenerla cuenta de la placa. 2.5 Cuando en ninguna de las placas haya desarrollo de colonias, reportar como menor del inverso de la menor dilución usada. III.Prueba presuntiva para coliformes.

3.1 Inocular una serie de tres tubos conteniendo 10 ml de caldo lauril y campana de Durham, con 1 ml de dilución 10-1. Proceder de igual manera con las diluciones 10-2 y 10-3. En total deberán ser nueve tubospor muestra. Incubar los tubos por 48 h a 35° C. Revisarlos a las 24 h, si la producción de gas es 3.2 positiva, realizar la prueba confirmativa, si no volver a incubar. IV. Prueba confirmativa de coliformes fecales. 4.1 De los tubos positivos (producción de gas) pasar de dos a tres asadas de cultivos a tubos con 10 ml de caldo EC con campanas de Durham. 4.2 Incubar por 48, a 37° C. 4.3...