Microscopio Campo Obscuro

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 InicioIntroducciónCapítulo 1:
Limitaciones para el estudio de células y tejidosCapítulo 2:
Nociones básicas de ópticaCapítulo 3:
La imagen. Sistemas ópticosCapítulo 4:
El microscopio compuestoCapítulo 5:
El microscopio electrónico Capítulo 6:
Técnicas especiales de microscopíaCapítulo 7:
Nuevas tendenciasConclusionesBibliografíaAnexos  
   |  LA MICROSCOPÍA:HERRAMIENTA PARA ESTUDIARCÉLULAS Y TEJIDOS |
| CAPÍTULO 6
TÉCNICAS ESPECIALES DE MICROSCOPÍA6.1.-Microscopio de campo oscuroDe manera similar a un cielo nocturno en el cual brillan las estrellas o al iluminar con una linterna un cuarto oscuro y las partículas de polvo flotantes en el aire se tornan visibles porque reflejan o difractan la luz, los especímenes observados al microscopio de campo oscuro se ven blancos ybrillantes sobre un fondo oscuro (negro).La iluminación de campo oscuro se puede realizar tanto mediante luz transmitida (trans-iluminación) como con luz incidente (epi-iluminación). En el primer caso, para lograr el efecto se requiere bloquear la parte central del rayo de luz que normalmente pasa a través y alrededor del espécimen, de tal manera que sólo sea iluminado por rayos oblicuos. Lamanera más fácil y económica de lograrlo consiste en colocar un filtro circular opaco (por ejemplo círculos de cartulina negra o una moneda adherida a un círculo de vidrio o plástico transparente) bajo el condensador de un microscopio compuesto ordinario. Esta maniobra funciona bien con objetivos de 10x-40x; el diámetro del circulo opaco debe ser de aproximadamente 16-18mm para un objetivo de 10x cuyaapertura numérica sea de 0.25. Para un objetivo de 20x o 40x con una apertura numérica de 0.65, el diámetro del círculo opaco debe oscilar entre 20-24mm. Para la iluminación con luz incidente o iluminación oblicua se emplea un filtro en forma de luna en cuarto decreciente (en forma de C), obteniéndose una interesante imagen con relieve (15, 96) (fig. 6-2).El método más apropiado consiste en elempleo de un condensador característico que además mejora la resolución (12, 15) (fig. 6-3). Con este dispositivo se forma un cono hueco de luz (cuyo centro es oscuro) que incide lateralmente sobre la muestra y sólo los rayos que son difractados o reflejados por las estructuras penetran en la lente objetivo y la célula aparece como un objeto luminoso sobre un fondo oscuro (21) (figs. 6-4 y 6-5).Figura 6-2.-Modelos de filtros de fácil realización para lograr la técnica de campo oscuro (izquierda y centro) e iluminación oblicua (derecha, en cuarto decreciente). Para campo oscuro el diámetro de la máscara negra central dependerá del objetivo que se emplee. Con objetivos de mayor aumento y apertura numérica, se requiere un disco negro de mayor diámetro. Modificado de Wim van Egmond (2002).'Easy to make' contrast enhancement filters for the microscope dark-field, oblique and Rheinberg illumination (96).  Figura 6-3.-Configuración esquemática del principio de iluminación de campo oscuro (luz transmitida). El filtro opaco es de forma circular y forma un cono de luz vacío que incide sobre el espécimen en forma oblicua y los rayos refractados, difractados y reflejados por el espécimenpenetran en el sistema óptico del microscopio para formar la imagen. Modificado de Davison M, Abramowitz M. Optical Microscopy. Olympus Microscopy Resource Center (15). Figura 6-4.-Células epiteliales observadas en microscopio de campo oscuro. Modificada de Wegerhoff, R., Weildich O, Kassens M. (2005). Basis of light microscopy image (12). Figura 6-5.-Micrografías de la superficie de una hoja quemuestran diferencias de contraste entre los diversos tipos de iluminación. En la parte inferior se aprecia el tipo de filtro empleado, en campo claro (derecha) el haz de luz pasa sin interrupción. En campo oscuro, aún muchos detalles más pequeños son visibles. En iluminación oblicua se obtiene contraste con relieve. En campo claro el contraste es limitado. Modificado de Wim van Egmond (2002). 'Easy...