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UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS PROGRAMA DE BIOLOGIA DOCENTE: MONICA SIRLEY CELIS-GRANADA

      LABORATORIO No 5: CROMATOGRAFIA

La cromatografía es una técnica de fraccionamiento que permite la separación de los componentes de los componentes de una mezcla por el arrastre selectivo que ejerce un solvente (liquido o gaseoso) el cual se mueve a través de un materialporoso. El solvente constituye la fase móvil y el material poroso (por ejemplo un papel cromatográfico o un gel) se denomina fase estacionaria. Según que la case sea un gas o un liquido, la cromatografía se llama “en fase gaseosa” o “en fase liquida” respectivamente. En esta practica se trabajara con la segunda utilizando como fase estacionaria diferentes tipos de papel. Los halos de los diferentescolores dejados por una gota de tinta sobre un papel secante es ya una cromatografía.

OBJETIVOS Con esta práctica se pretende que el estudiante: 1. Conozca las técnicas generales empleadas en el proceso de la cromatografía 2. Aplique las técnicas cromatográficas en el análisis cualitativo de muestras orgánicas e inorgánicas 3. Aprenda a interpretar diferentes cromatogramas MATERIALES Papelcromatográfico Papel de filtro Papel periódico blanco Papel bond Agua destilada Acetona 8%- éter de petróleo 92% (en volumen) Acetona Éter de petróleo Acetona- cloroformo (1:1 en volumen) Hojas verdes (ejemplo: espinaca, caucho, geranio etc) Tinta Parker negra Tubos de ensayo Lámparas Gasa Gradillas Palillos de dientes o pipetas Pasteur Cuchillas Pipeta de %ml Reglas Morteros Beaker de 50ml Embudo deseparación

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS PROGRAMA DE BIOLOGIA DOCENTE: MONICA SIRLEY CELIS-GRANADA

PROCEDIMEINTO 1. CROMATOGRAFIA DE UNA MUETRA INORGANICA: Tome un tubo de ensayo y coloque en él 2ml de agua destilada sin mojar las paredes. Coja, por los bordes, una tira de papel cromatográfico de una longitud aproximada a la del tubo de ensayo y corte uno de susextremos de forma aguda. Con un palillo de diente o una pipeta Pasteur coloque, a unos 2 cm del extremo agudo de la tira de papel y en su parte central, una pequeña gota de tinta. Deje secar y luego introdúzcala en el tubo evitando que se doble y que la muestra toqué la superficie del agua. Coloque el tubo en una gradilla y déjelo en reposo hasta que el solvente (agua destilada) esté para llegar alextremo libre de la tira de papel. Retire el papel y marque inmediatamente el punto al cual llegó el solvente. Mida la distancia recorrida por el solvente desde es centro de la muestra hasta el punto que señalo. Mida a demás la distancia máxima recorrida por cada uno de los pigmentos desde el centro de la muestra. Anote estos datos en una tabla de resultados identificando los pigmentos comoamarillo, naranjado, azul, azul claro, etc. Conserve este cromatograma para posterior utilización. (La observación del cromatograma a la luz de una lámpara permite ver mas detalles). 2. CROMATOGRAFIA DE UNA MUESTRA ORGANICA: 2.1 Para extraer los pigmentos vegetales se procede de la siguiente manera: se trituran en un mortero hojas verdes hasta obtener una especie de pasta. Se agrega una muestra deAcetona- cloroformo en partes iguales, se agita bien y se filtra a través de una capa de gasa. El filtrado se recoge en un embudo de separación con le objetivo de obtener la porción verde esmeralda de la parte superior que contiene los pigmentos vegetales con los cuales se trabajará. Para realizar esta cromatografía proceda en la misma forma como lo hizo con la tinta teniendo presente que al depositarla muestra, ésta debe quedar bien oscura. Para ello aplique unas cinco gotas en el mismo punto dejando secar cada gota antes de colocar la siguiente. Utilice como solvente 2ml de la mezcla éter de petróleo-acetona (92% y 8% en volumen). Anote los datos en la tabla y conserve el cromatograma 2.2 Cromatografía en hojas de espinacas • • Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas,...
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