OPTIMIZACIÓN DE UNA PCR-TOUCHDOWN PARA LA DETECCIÓN DE GENES cry1, cry2 Y cry9 EN AISLADOS NATIVOS DE Bacillus thuringiensis

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE TAMAULIPAS
UNIDAD ACADÉMICA MULTIDISCIPLINARIA REYNOSA AZTLÁN





OPTIMIZACIÓN DE UNA PCR-TOUCHDOWN PARA LA DETECCIÓN DE GENES cry1, cry2 Y cry9 EN AISLADOS NATIVOS DE Bacillus thuringiensis

TESIS


OPTIMIZACIÓN DE UNA PCR-TOUCHDOWN PARA LA DETECCIÓN DE GENES cry1, cry2 Y cry9 EN AISLADOS NATIVOS DE Bacillus thuringiensis


ÍNDICE


Lista detablas -----------------------------------------------------------------------------------
v
Lista de figuras ----------------------------------------------------------------------------------
vi
Abreviaturas -------------------------------------------------------------------------------------
vii
Resumen------------------------------------------------------------------------------------------
Abstract --------------------------------------------------------------------------------------------
viii
x
1. Introducción ----------------------------------------------------------------------------------
1
2. Antecedentes ----------------------------------------------------------------------------------
5
2.1 Bacillus thuringiensis-------------------------------------------------------------------
5
2.2 Proteínas Cry -----------------------------------------------------------------------------
6
2.3 Genes cry ----------------------------------------------------------------------------------
7
2.4 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) ----------------------------------------
9
2.5 Pasos de la PCR--------------------------------------------------------------------------
9
2.6 Reactivos para PCR ----------------------------------------------------------------------
10
2.7 Estudios para PCR y Bacillus thuringiensis ------------------------------------------
11
3. Justificación -----------------------------------------------------------------------------------
15
4. Objetivos--------------------------------------------------------------------------------------
16
4.1 Objetivo general -------------------------------------------------------------------------
4.2 Objetivos específicos --------------------------------------------------------------------
16
16
5. Material y métodos --------------------------------------------------------------------------
17
5.1Monitoreo de cristales de Bacillus thuringiensis -----------------------------------
17
5.2 Extracción de DNA plasmídico -------------------------------------------------------
17
5.3 Preselección de aislados nativos de Bacillus thuringiensis mediante amplificación de los genes cry1,cry2 y cry9 -------------------------------------------------
18
5.4 Estandarización dePCR-touchdown para detectar la presencia de genes cry1, cry2 y cry9 -------------------------------------------------------------------------------------
20
5.5 Electroforesis -----------------------------------------------------------------------------
20
5.5.1 Visualización de DNA plasmídico -----------------------------------------------
20
5.5.2 Visualización deproductos de PCR ---------------------------------------------
20
6. Resultados -------------------------------------------------------------------------------------
21
6.1 Observación microscópica del cristal parasporal en muestras de Bacillus thuringiensis -----------------------------------------------------------------------------------

21
6.2 Extracción de DNA plasmídico--------------------------------------------------------
22
6.3 Detección de los genes cry1, cry2 cry1, cry2 y cry9 mediante PCR --------------
23
6.3.1 PCR Convencional -----------------------------------------------------------------
23
6.3.2 PCR Touchdown -------------------------------------------------------------------
25
6.3.3 PCR Multiplex-Touchdown...