Parasitologoa

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
 Por el Ing. Agr. Carlos A. González
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 La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN.
Se trata de una técnica usada para crear un gran número de copias de un segmento de ADN, que utiliza ciclos de desnaturalización, apareamiento con cebadores y extensión poruna ADN polimerasa termoresistente.
Hasta la década de 1980, el único método para obtener grandes cantidades de un fragmento de ADN era clonándolo en vectores adecuados e introduciéndolo y multiplicándolo en bacterias. En el año 1985, un investigador norteamericano, Kary Mullis (acreedor del Premio Nobel en Química 1993 por este aporte), desarrolló un método que permite, a partir de una muestramuy pequeña de ADN, obtener millones de copias de ADN in vitro, en unas pocas horas y sin necesidad de usar células vivas. Esta técnica, llamada reacción en cadena de la polimerasa (PCR), requiere conocer la secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento que se quiere amplificar. Estas secuencias se usan para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de ADN complementarios a una porción decada una de las dos cadena de la doble hélice.
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| |1. La mezcla de reacción contiene la secuencia de DNA que se quiere |
||amplificar, dos oligonucleótidos sintéticos (P1 y P2) que servirán |
| |como cebadores, una DNA polimerasa termoestable (Taq) y los cuatro |
||desoxirribonucleótidos trifosfato –dATP, dGTP, dCTP y dTTP–. |

2. Proceso:
La mezcla de reacción se somete a ciclos sucesivos, cada uno correspondiente a una fase de desnaturalización, una de hibridación o alineación y una de elongación.
|[pic] |a) Durante la desnaturalización, que serealiza por calentamiento de la |
| |mezcla a 95ºC, se separan las dos cadenas del ADN molde. |
| |b) Durante la hibridación, la temperatura de incubación se reduce para |
||permitir el apareamiento de las bases de ambos cebadores en el sitio |
| |donde encuentran una secuencia complementaria. |

c) Durante la fase de elongación, la mezcla se calienta a 72ºC y la enzima Taq ADNpolimerasa se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el proceso de extensión de la cadena complementaria a partir del extremo 3’ de los cebadores. Al finalizar cada ciclo, la cantidad de ADN molde disponible para el ciclo siguiente aumenta al doble.
Entre muchas de las aplicaciones que la PCR pone a disposición se encuentran la detección precoz o prenatal de enfermedadesgenéticas, la detección de infecciones virales latentes o la producción de grandes cantidades de fragmentos de ADN humano a una velocidad muy superior a la posible mediante otros métodos. Esta técnica también se aplica para estudios de identidad y filiación.
 
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