Plasmidos

2. REPLICACIÓN DE LOS PLASMIDOS
El elemento genético que controla el número de copias del plásmido se encuentra en una región del ADN plasmídico que incluye el orígen de replicación. El orígen dereplicación y los elementos de control asociados definen la unidad genética llamada « replicón ».
Clonado
vector de clonaje:
El principio de clonado consiste en insertar un segmento de ADN extranjeroen una molécula pequeña capáz de replicarse automática. A ése tipo de molécula de ADN se lo denomina vector de clonaje.
plásmidos recombinados:
Los plásmidos son excelentes vectore de clonaje.Puede ser "cortado" con una ó dos enzimas de restricción ó puede incorporársele un fragmento de ADN que ha sido previamente cortado usando mas mismas enzimas de restricción. Los plásmidos así modificadosse los denomina plásmidos recombinados. En éste estado, se los introduce entonces en una bacteria donde serán replicados.
Emarcador de selección:
Es crucial el poder distinguir entre las coloniasque contienen los pásmidos recombinados de aquellas que contien ya sea plásmidos no recombinados ó que no contienen ningún plásmido. Varios métodos existen para realizar ésta distinción y se basan en eluso de un marcador de selección. En el ejemplo de abajo por ejemplo, el marcador de selección es la ampicilina.


Clonado en bacterias es
insertar un segmento de ADN extrangeros en un vectortransformar las bacterias
seleccionar las bacterias transformadas.
[pic]
1. El inserto de un segmento de ADN extranjero en un plásmido:

[pic]
2. transformación de bacterias por el plásmido.
[pic]3. selección de bacterias transformadas.

cualidades de un vector de clonado
 
los plásmidos deben ser pequeños y de replicación con control relajado. La mayoría de los plásmidos en usocontienen un replicón derivado del plásmido pMB1, inicialmente aislado de una muestra clínica. En condiciones normales de cultivo, se encuentra un mínimo de 15 a 20 copias de plásmido que contienen el...