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PRACTICA;
*AISLAMIENTO DE BACTERIAS*

I. OBJETIVO
Aislar dos microorganismos por la técnica de siembra de dilución por estría en
placa de agar y obtener un cultivo axénico o puro.

II. INTRODUCCION
Si se toma un asa bacteriológica cargada con una muestra que contenga bacterias y se van haciendo estrías de ésta sobre una placa de agar nutritivo de tal manera que el material se vaya“diluyendo” sobre la superficie (Fig. 12.1), llegará un momento en que las bacterias depositadas en la estría estén bien separadas unas de otras, reproduciéndose cada una en progresión geométrica (1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, etc.).
Dependiendo del tiempo de generación, que varía según la especie bacteriana,
después de cierto tiempo, cada una se habrá multiplicado muchas veces,
formando sobre la superficiedel medio un pequeño promontorio constituido por
células bacterianas llamado Colonia, que se obtiene generalmente en unas 24-48 horas.
Las colonias de cada especie bacteriana son diferentes ya sea en tamaño, color, consistencia etc., y pueden ser diferenciadas sobre estas bases.
Cada colonia aislada está constituida de un solo tipo de bacterias, ya que se
supone que es la descendencia de unasola célula y por tanto, un cultivo puro.
Para estudiar las características físicas, químicas, fisiológicas, etc., de una
bacteria, se necesita que ésta sea aislada en cultivo puro y el aislamiento en caja Petri es el primer paso para ello, siendo el segundo paso la siembra de una porción de una colonia en un medio de cultivo en tubo, verificando su pureza después de la incubación apropiada,mediante observación al microscopio.
La morfología de las colonias es importante por lo anteriormente expuesto y debe familiarizarse el alumno con ella. (Fig. 12.2). La terminología mencionada a continuación sobre algunas de las características más constantes de una colonia bacteriana es muy útil:

FORMA:
Puntiforme, circular, irregular, alargada, fusiforme, filamentosa, rizoide, etc.
TAMAÑO:Estimar el diámetro en mm.
SUPERFICIE:
Lisa, rugosa, cerebriforme, en anillos concéntricos, etc.
ELEVACION:
Aplanada, elevada, pulvinada, convexa, umbonada, umblicada, etc.
BORDE:
Continuo, ondulado, lobulado, erosionado, festoneado, filamentoso, etc.
ESTRUCTURA INTERNA:
Amorfa o granulosa.
COLOR:
Según sea observado por la luz reflejada o por la luz transmitida, puede ser de
color blanco,amarillo, rojo ladrillo, anaranjado, etc.
OPACIDAD:
Transparente, opaca, etc.
CONSISTENCIA:
Dura, viscosa, membranosa, gelatinosa, mucosa, etc. Usar el asa bacteriológica
para determinar la consistencia.

III. MATERIAL Y SUBSTANCIAS.
- Caja de Petri conteniendo agar nutritivo estéril.
- 2 Tubos de ensayo conteniendo agar inclinado.
- Tubos de ensayo conteniendo cultivo mixto.
-Lápiz graso.
- Asa bacteriológica.
- Mechero Bunsen.
- Cerillos ó encendedor.
- Gradilla.
IV. TECNICA

1. Con el lápiz graso dividir la caja Petri en 3 sectores, de tal manera que al
destaparla para proceder a la inoculación, se tenga como se indica en la figura:
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El sector No. 1 es más pequeño y sirve para descargar el asa.
2. Usando la técnica ya conocida, tomar el cultivobacteriano y en condiciones
asépticas obtener una asada del material.
3. Una vez cerrado el tubo, colocarlo en una gradilla.
4. Con la mano izquierda levantar parcialmente la tapa de la caja de Petri y descargar el material en el sector 1, trazando una serie de zig-zags muy cerrados a todo lo ancho del sector. Cerrar la caja.
5. Esterilizar el asa flameándola y mientras que se enfría, girar la caja90° hasta
que el sector 1 quede a la izquierda y el 2 hacia arriba a la derecha.
6. Trazar unos 5 zig-zags en el sector 2 invadiendo el sector 1 para llevar un poco
de material al sector 2 y las siguientes estrías no deben tocar el sector 1. En
esta forma se diluye el material quedando unas bacterias separadas de las
otras.
MICROBIOLOGIA APLICADA
7. Esterilizar de nuevo el asa, girar la...
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