Práctica de Bioquímica

PRÁCTICA 1. RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS

En esta práctica se realizarán reacciones químicas y pruebas características para identificar la presencia de una o varias biomoléculas en una mezcla y para cuantificar alguna de ellas. Finalmente, se estudiarán algunas actividades enzimáticas.

1.- Identificación de glúcidos con poder reductor

Todos los monosacáridos y los disacáridos conenlace monocarbonilo, cuando se encuentran en solución a pH alcalino, tienen la capacidad de reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las características del grupo carbonilo (C anomérico en formas cicladas) libre. Esta propiedad, y por tanto, la presencia de un azúcar reductor, se pone de manifiesto mediante la reacción de FEHLING.
El reactivo de Fehling consta de :
-Fehling A: CuSO4 35g +acido sulfúrico 5.0 ml en csp 1000 disuelto en H2O d
-Fehling B: NaOH al 40% 375 ml ,Tartrato Na-K 200g disueltos en aguacsp 1000ml

Fundamento de la reacción: En medio alcalino, el cobre procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidróxido cúprico, y se forma la correspondiente sal Na2SO4. Cuando el Cu(OH)2 (de color azul) se calienta en presencia de un compuesto reductor se forma óxidocuproso (de color rojo ladrillo).



Si hay un compuesto reductor, el Cu cambia su estado de oxidación de (2+ a 1+), lo que se evidencia por el cambio de color.

Práctica

Sobre la mesa hay dos soluciones de glúcidos: GLÚCIDO I y GLÚCIDO II. Hay que determinar si son reductores.
Método:
1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de glúcido I y en otro tubo 2mL de glúcido II.
2. Añadir acada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B.
3. Calentar a la llama.
Cuestiones
1. ¿Cuál o cuáles son los azúcares reductores?
2. ¿Quién se oxida y quién se reduce en la reacción?
3. ¿Para qué sirven el tartrato Na-K y el calor?
4. ¿Qué resultado daría la reacción de Fehling con glucosa? ¿y con sacarosa?

2.- Identificación de polisacáridos: identificación de almidón mediantela prueba del Lugol

En solución acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formación de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las moléculas de H2O. Si a una dilución de almidón de le añade Iodo, esta toma un color azul intenso. Esta característica es específica del almidón, debido a su estructura, y se debe a la adsorcióndel I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reacción química, sino una interacción física reversible por métodos físicos. Esto se puede comprobar fácilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.

Práctica
Sobre la mesa hay dos soluciones, solución 1 y solución 2. Hay que identificar cuál de ellas tienealmidón.
Método:
1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solución 1 y en otro 2 mL de la solución 2.
2. Añadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (Iodo 5g + 10 g Ioduro potásicocsp100ml ). Observar el resultado.
Para comprobar que es una interacción física
1. Calentar a la llama el tubo que contiene almidón (teñido de azul con I), hasta que desaparezca el color azul.
2.Enfriar en el grifo y observar la aparición de nuevo de color azul.
Cuestiones
1. ¿Cuál de los dos soluciones contiene almidón?
2. ¿El almidón daría positiva la reacción de Fehling?
3. ¿La celulosa daría positiva la prueba del Lugol?
4. ¿El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? ¿Por qué?

3.- Identificación de lípidos. Reacción de saponificación.

La presencia deun lípido se puede detectar fácilmente por su insolubilidad en agua. Además, se puede detectar si un lípido es saponificable, mediante la reacción de saponificación, o formación de jabón.
Los ésteres de ácidos grasos sufren hidrólisis en presencia de un agente alcalino. Esta hidrólisis conduce a la liberación del alcohol y a la formación de sales de ácido graso o jabones:



Práctica...