Prácticas De Bioquímica

REACCCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES
INTRODUCCIÓN
En ésta práctica, de lo que se trata es de, mediante reacciones
coloreadas de carácter cualitativo, detectar cada disolución problema e
identificarlo con uno de los azucares siguientes: sacarosa, fructosa, lactosa
y glucosa. También, con esta práctica, tratamos de diferenciar
monosacáridos de disacáridos.
Para ello se seguirán unaserie de pasos que a continuación explicaremos.
MATERIALES COMUNES A LAS CUATRO PRUEBAS
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16 tubos de ensayo
Una pipeta graduada de 1ml
Una pipeta graduada de 5ml
Un vaso de precipitados de 500ml
Una varilla de vidrio
Una placa de calentamiento
Una gradilla para tubos de ensayo

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. PRUEBA DE MOLISCH
• Este ensayo es un ensayo parareconocimiento general de
carbohidratos en el que los polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con
ácido sulfúrico concentrado hasta monosacáridos y se convierten en
derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con
alfa naftol dando un color púrpura violeta.
• Reactivos y material
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Reactivo de Molisch: α-naftol al 1% en etanol
Ácido sulfúrico concentrado
Reactantessólidos: carbohidratos

• Método experimental
Se coloca en un tubo de ensallo 1ml. de la disolución problema al 10% y se
le agrega 5 gotas de reactivo de Molisch, se agita para que se mezcle bien y
a continuación se adiciona cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml.de
ácido sulfúrico concentrado, de modo que se forme una fase ácida en la zona
inferior de la disolución que contiene el problemay el α-naftol. Al mismo
tiempo es conveniente realizar un blanco de agua.
La formación de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para
carbohidratos (indicando la presencia de glúcidos solos o combinados). Al
agitar la disolución ese color violáceo se hará más intenso y uniforme ya que
se mezclan las dos fases de la disolución.

2. PRUEBA DE FEHLING
• Este ensayo detecta lapresencia de sustancias reductoras.
El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Ambas se guardan
separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del
hidróxido de cobre (II). El tartrato al unirse al cobre forma un complejo
soluble e impide la formación de hidróxido cúprico insoluble que tendría
lugar si existiese cobre libre. Si un azúcar reduce el licor deFehling a óxido
de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor. Al reaccionar con
monosacáridos, se torna azulado; si lo hace con disacáridos, toma el color
del ladrillo.
SO4Cu + 2 NaOH --------- SO4Na2 + Cu(OH)2
2 Cu(OH)2 + R-CHO ---------- RCOOH + H2O + Cu2O
• Reactivos y material
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Disolución Fehling A: 16,7g de SO4Cu. 5H2O en 250 ml
H2O.
Disolución Fehling B: 86,7g de tartratosódico potásico y
25g de NaOH disueltos en 250ml de H2O a T ambiente.
Reactantes sólidos

• Método experimental
Se prepara la disolución de los dos reactivos de Feheling en un vaso de
precipitados. A 2ml de cada una de las disoluciones problema se les añade
2ml del reactivo de Feheling. A continuación se agitan bien los tubos de
ensayo y se deja en un baño de agua hirviendo durante 3-7minutos. La
reacción es positiva al aparecer una coloración naranja-rojiza que se
concreta en un precipitado rojo ladrillo según la cantidad de material
reductor existente en el tubo.

3. PRUEBA DE SELIWANOFF
• Este ensayo detecta la presencia de cetohexosas. Es propio de
cetosas. Al hervir éstas con ácidos diluidos se convierte, la cetosa, en 5hidro-metil-furfural y posteriormente se condensa conresorcinol formando
así complejos coloreados de un color rojo brillante. La estructura de este
producto es desconocida.
• Reactivos y material
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Reactivo de Seliwanoff: 0,013g de resorcina en 25ml de
ClH diluido (1 volumen de ClH y dos de agua). Se prepara en
el momento de su empleo.
Disoluciones: 0,1 M de glucosa, xilosa, fructosa …

• Método experimental
Se colocan en un...