practica de bioquimica

Practica “Cromatografía de aminoácidos”
Objetivos:
Definir a los aminoácidos.
Conocer las características estructurales comunes de los aminoácidos.
Conocer las características y elementos de la cromatografía

Introducción:
Los aminoácidos (AA) son un grupo heterogéneo de moléculas que poseen unas características estructurales y funcionales comunes, y que cumplen diversas funcionescomo transmisión nerviosa, síntesis de biomoléculas e intermediarios metabólicos. Existen una gran cantidad de aminoácidos, se han identificado alrededor de 300 pero sólo 20 de ellos son comunes en las
proteínas de la gran mayoría de los organismos. Los AA, estructuralmente hablando, constan de un carbono alfa (α-Carbono) unido a un grupo amino (-NH2), a un ácido carboxílico (-COOH), a un hidrógeno(H) y un grupo o cadena R. La cadena R es de estructura variable y es la responsable de las características particulares de los AA y de su clasificación.

La Cromatografía es una técnica analítica que permite la separación e identificación de los componentes de una mezcla mediante la afinidad de cargas o polaridad, esta técnica puede ser utilizada de manera cualitativa o cuantitativa, requierede una fase móvil o disolvente que desplazará, si existe afinidad, a las sustancias a través de un soporte o fase estacionaria, en este caso se trata de sílica gel. A medida que el disolvente se desplace por la fase estacionaria, podrá ir dejando a su paso cada uno de los elementos que conforman la mezcla, esto dependerá de:
Naturaleza química
Peso molecular
Polaridad
Mezcla del disolventey proporciones

Material, reactivos y equipo:
Material
Vaselina
Capilares
Placa cromatográfica de sílica gel en soporte de aluminio
Cámara de elusión




Reactivos
Mezcla Butanol: Ácido acético: Agua (8:2:2)
Patrones de aminoácidos
Muestra problema
Solución de ninhidrina 0.3%

Equipo
Estufa

Método:
Calentar la placa cromatográfica de sílica gel en la estufa a 110grados centígrados por 15 minutos.
Con la ayuda de una regla y lápiz, dibujar una línea a unos 2 cm de la base sobre la cual se distribuirán 5 marcas, tratando de que quede lo mejor distribuidas pues se colocarán las muestras de aminoácido patrón y una muestra problema.

Utilizando un capilar adicionar cada uno de los aminoácidos conocidos, esto se hará en los puntos uno a cuatro empleando uncapilar por cada aminoácido.
En el quinto punto adicionar la muestra problema.
Dejar secar al aire.
Colocarla placa de forma vertical en la cámara cromatográfica y taparla,para ello deslizar la tapa sobre la cámara.
Dejar que el disolvente fluya libremente hasta un centímetro antes del borde superior.
Sacar la placa y con un lápiz marcar la línea donde llegó el disolvente, la distanciae esta línea hasta el borde inferior se le llama Frente del disolvente
Secar la placa al aire y rociarla de ninhidrina con un aspersor.
Colocar la placa en una parrilla de calentamiento hasta que aparezcan las manchas correspondientes.
Con un lápiz delinear, suavemente, las manchas formadas entre el aminoácido y la ninhidrina. Se obtienen colores azules o púrpuras para todos los aminoácidosexceptuando la prolina e hidroxiprolina que producen un color amarillo
Medir la distancia del centro de la mancha al punto de aplicación, esta distancia es el frente del soluto.
Calcular el Rf para cada mancha e identificar el aminoácido que existe en la muestra problema.

Desarrollo:

Colocamos 3 gotas de cada aminoácido en la división creada y 3 de orina en la sexta división.
Se colocóel cromatofolio en la cámara de cromatografía que contiene un solvente especial hecho de agua, butano y ac. Acético.
Observamos la ADSORCION, o sea, el solvente sube a través del gel y arrastra los aminoácidos a su paso
Esperamos 30 minutos
Marcamos la altura del solvente y después rociamos la placa con Ninhidrina (revelador de color), dejamos secar .
Marcamos la altura que los aminoácidos...