practica bio
Páginas: 4 (901 palabras)
Publicado: 31 de mayo de 2013
1. OBJECTIUS
Conèixer la tècnica més habitual en la quantificació de proteïnes
Obtenir el espectre de visible amb el mètode de Bradford.
Calcular la concentració de proteïnes en una odiverses mostres.
2. FONAMENT TEÒRIC. QUANTIFICACIÓ DE PROTEÏNES. MÈTODE DE BRADFORD.
Hi ha diversos mètodes descrits per a la quantificació de proteïnes. El més obvi és la determinació del màximd’absorció a 280 nm. Altres alternatives són el mètode del Biuret o el mètode de Lowry. El mètode més comú en els laboratoris de biotecnologia és el mètode de Bradford. A més el resultat obtingut en la determinació de la concentració de proteïnes ens serà molt útil per a determinar la quantitat de mostra a aplicar en l’electroforesi de proteïnes.
El mètode està basat en la interacció entre elcolorant blau de Comassie (Reactiu de Bradford) amb les proteïnes. Aquest colorant pot existir en diverses formes iòniques essent els seus pKa 1,15; 1,82 i 12,4. Habitualment, per tant en medis àcids oneutres no es presenta en la seva forma més bàsica i forma diverses espècies de coloracions que oscil·len entre el vermell i el verd. Ara bé quan interaccionen amb les proteïnes adopten la seva forma mésaniònica i aquesta absorbeix a 595 nm donant una coloració de color blau. La mesura de la seva absorció ens permetrà determinar la concentració de la proteïna en la nostra mostra.
La determinacióno és possible si no es realitza abans una recta de calibrat. Com a patró s’utilitza habitualment BSA (Albúmina de sèrum boví). Es preparen 7 patrons amb diferents concentracions d’aquesta proteïnaen aigua, s’afegeix el reactiu de Bradford i es mesura la seva absorbància. Igualment, amb la mostra problema tractada amb el reactiu de Bradford ens donarà una absorbància a partir de la qual seràfàcil determinar la concentració de proteïna a la mostra, i per tant la quantitat total de proteïna.
El tractament de les dades amb el programa Excel ens permetrà determinar les concentracions...
1. OBJECTIUS
Conèixer la tècnica més habitual en la quantificació de proteïnes
Obtenir el espectre de visible amb el mètode de Bradford.
Calcular la concentració de proteïnes en una odiverses mostres.
2. FONAMENT TEÒRIC. QUANTIFICACIÓ DE PROTEÏNES. MÈTODE DE BRADFORD.
Hi ha diversos mètodes descrits per a la quantificació de proteïnes. El més obvi és la determinació del màximd’absorció a 280 nm. Altres alternatives són el mètode del Biuret o el mètode de Lowry. El mètode més comú en els laboratoris de biotecnologia és el mètode de Bradford. A més el resultat obtingut en la determinació de la concentració de proteïnes ens serà molt útil per a determinar la quantitat de mostra a aplicar en l’electroforesi de proteïnes.
El mètode està basat en la interacció entre elcolorant blau de Comassie (Reactiu de Bradford) amb les proteïnes. Aquest colorant pot existir en diverses formes iòniques essent els seus pKa 1,15; 1,82 i 12,4. Habitualment, per tant en medis àcids oneutres no es presenta en la seva forma més bàsica i forma diverses espècies de coloracions que oscil·len entre el vermell i el verd. Ara bé quan interaccionen amb les proteïnes adopten la seva forma mésaniònica i aquesta absorbeix a 595 nm donant una coloració de color blau. La mesura de la seva absorció ens permetrà determinar la concentració de la proteïna en la nostra mostra.
La determinacióno és possible si no es realitza abans una recta de calibrat. Com a patró s’utilitza habitualment BSA (Albúmina de sèrum boví). Es preparen 7 patrons amb diferents concentracions d’aquesta proteïnaen aigua, s’afegeix el reactiu de Bradford i es mesura la seva absorbància. Igualment, amb la mostra problema tractada amb el reactiu de Bradford ens donarà una absorbància a partir de la qual seràfàcil determinar la concentració de proteïna a la mostra, i per tant la quantitat total de proteïna.
El tractament de les dades amb el programa Excel ens permetrà determinar les concentracions...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.