Practica De Laboratorio "Espectrofotometría"
3a. Práctica de Laboratorio:
""CÁLCULO DE RECTAS PATRÓN Y OBSERVACIÓN DE COLORES DEL ESPECTRO DE LUZ VISIBLE"
SECCIÓN 002-EQUIPO 1
Integrantes:
* BARCENAS VILLALOBOS ALMA GABRIELA
* LEGASPI MORANCHEL AARÓN
* ORTIZ ACOSTA MIGUEL ANGEL
* PÉREZ VARGAS SAÚL
* ROJAS LUCERO WENDY ANGELINA
* TOXQUISTEFFANONI NORMA GIANELLI
PERIODO: OTOÑO 2012
En esta práctica aprenderemos a preparar disoluciones de sulfato de cobre con ayuda de la micropipeta, la balanza analítica y el agitador magnético, también la utilización del espectrofotómetro y conforme a los resultados elaborar una recta patrón. En el espectrofotómetro observamos los colores que proyectan a diferentes longitudes de ondadel espectro de luz visible y su absorbancia. Con ayuda de este encontraremos la absorbancia de las disoluciones para ello es imprescindible establecer la referencia en un tubo que contenga todos los componentes de la reacción excepto la sustancia a determinar que se denomina blanco.
EXPLICACIÓN DEL PROFESOR
ESPECTROFOTÓMETRO
ENCENDER REGULADOR
ENCENDER APARATO (BOTON UBICADO EN LA PARTEDE ATRÁS)
ESPERAR 10 MIN (PARA AUTOCALIBRACIÓN)
AJUSTAR LONGITUD ONDA A 400 nm
LEVANTAR LA TAPA PORTA CELDA
COLOCAR EN LA PORTA CELDA UN RECTÁNGULO DE 1 cm x 5cm
OBSERVAR Y REGISTRAR EL COLOR QUE SE PROYECTA (DESDE ARRIBA)
AJUSTAR LA LONGITU A 410nm Y OBSERVAR NUEVAMENTE
CONTINUAR AUMENTANDO 10 nm HASTA LLEGAR A 700 nm
CALCULANDO UNA RECTA PATRÓN
SOLUCIÓN DE SULFATO DECOBRE II(PENTAHIDRATO) DE CONCENTRACIÓN .4g/ml
TRAZAR RECTA PATRÓN GRAFICANDO ABSORBANCIA CONTRA CONCENTRACIÓN
MEDIR LONGITUD DE ONDA (A₆₇₅) LA ABSORBANCIA DE UNA SOLUCION QUE TE DE EL MAESTRO
TRAZAR LA RECTA PATRÓN
ESTABLECER REFERENCIA CON UN TUBO QUE CONTENGA TODOS LOS COMPONENETESDE LA REACCIÓN EXCEPTO SUSTANCIA A DETERMINAR.
MEDIR LA LONGITUD DE ONDA ADECUADA (A₆₇₅) LA ABSORBANCIA DELA DISOLUCIONES PREPARADAS (1/1,1/2,1/5,1/10,1/20)
DETERMINAR VALORES DE ABSORABANCIA INESPECÍFICA
PREPARAR SOLUCIONES DILUIDAS DE 10 ml DE VOLUMEN FINAL (1/1,1/2,1/5,1/10,1/20,V/V)
SE CUMPLE LA LEY DE LAMBERT-BEER
LA REPRESENTACIÓN ES LINEAL, PERMITE TRAZAR RECTA DE PENDIENTE PARA INTERPOLAR LA ABSORBANCIA.
CALCULAR CONCENTRACIÓN Y ELABORAR UNA GRAFICA DE CONCENTRACIÓN SERA RECTAGRAFICAR λ (nm) VS ABSORBANCIA DE CADA UNO DE LOS TUBOS.
A continuación se presenta una gráfica con curva de calibración donde se presentan en el eje x Concentración (g/ml) y en eje y la Absorbancia a una longitud de onda λ de 675 nm obtenidas de las diluciones seriadas realizadas; además de dos tubos problema suministrados por el profesor.
Concentración (g/ml)
Absorbancia λ 675 nm
TB2
TB14 x 10-20
4 x 10-10
0.4
4 x 10-5
0.04
En la gráfica podemos observar el decremento de absorbancia conforme al aumento en las diluciones, además de que en el tubo problema 1 la absorbancia es igual a la de la dilución 1:10 que corresponde a la concentración de .0000000004 g/ml mientras que en el tubo problema 2 la absorbancia es aproximada a la dilución 1:20 por lo que corresponde a laconcentración de .00000000000000000004 g/ml. La siguiente gráfica muestra la recta patrón justificada.
Absorbancia λ 675 nm
Concentración (g/ml)
Interpolación TB2
Interpolación TB1
Los alumnos Barriga Arteaga Luis Ángel y compañeros de la Universidad Nacional Autónoma de México (2011) realizaron una similar experimentación a la nuestra pero con el Yodo como sustancia para determinar suabsorbancia y a longitudes de onda desde 370 nm a 1000 nm.
A continuación se presenta una tabla con los resultados obtenidos para esa sustancia:
Longitud De Onda (λ) | Absorción | Longitud De Onda (λ) | Absorción |
370 | 0.006 | 700 | 0.049 |
380 | 0.637 | 720 | 0.023 |
400 | 0.732 | 740 | 0.044 |
420 | 0.794 | 760 | 0.056 |
440 | 0.901 | 780 | -0.045 |
460 | 0.756 | 800 | -0.009 |...
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