Practica doble difusion de ouchterlony en proceso

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  • Publicado : 30 de mayo de 2011
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PRACTICA
INMUNODIFUSIÓN RADIAL SIMPLE

MATERIAL:

* 1 caja petri estéril
* Micropipeta de 10µl
* 1 horadador de 2-3 mm de diámetro
* 1 perilla de hule
* Cubrebocas
* 1pipeta de 5ml, estéril
* 1 pipeta de 10ml, estéril
* 1 mechero
* Palillos de madera

MATERAL BIOLÓGICO:
* Antisuero de conejo antiovoalbúmina
* Ovoalbúmina (clara de huevo)REACTIVOS:
* Solución salina fisiológica
* Agar a una concentración de 1.2 g/dl, esterilizado, fundido y a 50° C
* Merthiolate al 10% o fenol al 5%
EQUIPO:
* Centrífuga
* Autodave* Campana de flujo laminar
TECNICA:
1.- En una caja petri estéril colocar 2 ml de antisuero de conejo antiovoalbúmina y distribuirlo por toda la caja; agregar 10 ml de agar fundido a 50°C ymezclarlo perfectamente con el antisuero.
2. Tapar las cajas y dejar solidificar sobre una superficie bien nivelada. Refrigerar durante 10 a 30 minutas para que la capa de agar esté firme y facilitar lahoradación.
3. Con el horadador practicar 8 cortes alrededor de la placa, como se muestra en el esquema. Para facilitar la ejecución de los cortes. Es conveniente trazar un esquema con las medidasreales en una hoja de papel y colocarlo debajo de la caja con la capa de agar.
4. Extraer el gel de agar de los cortes mediante una pipeta capilar haciendo un ligero vacio, o bien mediante unaplicador de madera con la punta rota, a manera de formar un pozo, teniendo mucho cuidado para no rasgar el agar.
5. Con una micropipeta o un tubo capilar colocar una gota muy pequeña de agar fundido enel fondo de cada pozo para separarlo y dejar que se solidifique; esto se hace con el fin de que los reactivos se difundan en la capa de agar y no entre la capa y el fondo de la caja, la quefalsearía las reacciones.
6. Preparar las siguientes diluciones de ovoalbúmina con solución salina isotónica: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 y 1:128.
7.- Colocar en el pozo 1,10µl de ovoalbúmina’ sin...
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