Practicas biomoleculas

1. Si inoculamos un cultivo con una célula única cuyo tiempo de generación es de 20 minutos, ¿Cuántas células se producirán en 24 horas?
La velocidad con que aumenta el número de células será proporcional al número inicial de células, según la expresión:

Reordenando e integrando llegamos a la siguiente expresión:
lnN – lnN0 = μ·(t-t0)
El tiempo de generación que tarda en duplicarse,sabiendo que el número de células de la primera generación será dos veces el número inicial de células:
ln = μ · (tg-t0)  ln2= μ·tg
Como el tiempo de generación del cultivo es de 20 minutos, calculamos la tasa de crecimiento:
μ = = =0.031 min-1
Ahora calculamos el número de células que se producirán en 24 horas, teniendo en cuenta que el tiempo inicial es 0, y que partimos de una célula:
N=eμ·t = 7.73 · 1021 células que se producen en 24 horas.

2. Toma nota de las absorbancias registradas y haz una representación frente al tiempo para registrar la curva de crecimiento.
El cultivo se introduce en una incubadora a mayor temperatura y agitación constante, facilitando el crecimiento del cultivo (bacterias 4).
Las absorbancias registradas se han medido a tiempo 0 y cada hora lasdos primeras medidas, y las restantes cada media hora, tomando aproximadamente 1 ml de cultivo y a una longitud de onda de 560 nanómetros.

Tiempo (min)
0
1
2
24.54
25.2
25.54
26.24
26.54
Absorbancias (U.A)
0.027
0.036
0.091
0.889
0.984
1.099
1.155
1.295



Como podemos observar, aparece una fase de latencia, y la curva debe ser exponencial.

3. Representa los logaritmosneperianos de las Absorbancias registradas frente al tiempo y calcula la tasa de crecimiento (μ) y tiempo de generación.
Tomamos t=0 para una absorbancia de 0.889, ya que el periodo de crecimiento exponencial ya había comenzado cuando iniciamos las medidas. Es necesario que obviemos los cuatro primeros puntos para obtener una buena regresión lineal:
Ln(t)
-0,69314718
0
0,40546511
0,69314718Ln(abs)
-0,01612938
-0,01612938
0,14410034
0,2585107

Al representar estos datos, obtenemos la siguiente curva de calibrado:



La ecuación que relaciona la tasa de crecimiento y la absorbancia es la siguiente:
Ln A = µ·t + Ln A0

Por tanto, identificamos ésta con la pendiente de la recta de calibrado:
𝛍= 0,1845 h-1
Y el tiempo de generación:
= 3.76 horas

4. Calcula el contenidoen β-caroteno, teniendo en cuenta que el coeficiente de extinción a 450 nm es de 280 mg-1 · ml y exprésalo en relación al peso fresco de células.
Para la determinación del contenido en carotenoides realizamos un espectro de absorción para nuestro cultivo para determinar la longitud de onda a la que la absorción del carotenoide producido es máxima:

A continuación, tomamos 10 ml del cultivobacteriano en un tubo previamente pesado. El peso de éste es 18.2148 g. Pesamos el cultivo en fresco, obteniendo un valor de 18.3234 g. Por tanto, el peso de moléculas frescas es de 0.1086 gr. Nosotros hemos llevado a cabo la extracción con 1 ml de metanol, por tanto, si calculamos la absorbancia del extracto a 450 nm, podemos calcular la concentración aplicando la ley de Lambert-Beer. El coeficientede extinción del carotenoide es 280 mg-1 · ml · cm -1por tanto, la concentración será:


Como hemos utilizado 1 ml de metanol, la cantidad de carotenoides es:

Expresándolo en relación con el peso fresco de células, el contenido en carotenoides será:


5. Anotar en la hoja de resultados las observaciones más relevantes.
Hemos colocado la placa con el cultivo sobre agar en la incubadora a37 ºC, para promover el crecimiento de este microorganismo. Vemos cómo aparece más pronunciado la marca que hicimos con el asa de siembra. Esto se debe al crecimiento de los microorganismos. Al final de la marca, observamos cómo han aparecido colonias, ya que al sembrar menos cantidad en una superficie mayor, conseguimos que hayan pequeñas cantidades de microorganismos que puedan generar...