Practicas de inmunologia clínica
Páginas: 19 (4596 palabras)
Publicado: 14 de noviembre de 2010
Prueba de Nitroazul de tetrazolio (NBT)
Introducción
La fagocitosis forma parte de la respuesta inespecífica uno de los mecanismo de defensa, esta se lleva a cabo por medio de dos series de células, la serie mieloide que incluye a los polimorfonucleares neutrofilos y linfocitica que incluye a los macrófagos.
Las células fagocíticas destruyen microorganismos a través de mecanismosdependientes de oxigeno, el primero incluye la participación de radicales libres, generados por el sistema NADPH-Oxidasa al transformar al oxigeno molecular en anión superóxido.
Las hidrolasas lisosomales se activan al acidificarse el medio fagosomal a través de la actividad de bomba de protones (ATPasa) presente en un tipo de endosomas, la actividad conjunta de los radicales libres y componenteslisosomales es la causa de muerte de los microorganismos ingeridos.
Objetivo:
Evaluar el índice fagocítico mediante la cuantificación del NBT analizando la integridad metabólica de los polimorfonucleares de suero humano.
Materiales y equipos
* Microscopio
* Incubadora
* Lancetas
* Jeringuillas y agujas
* Láminas portaobjeto
* Cámara húmeda
* Nitroazul detetrazolio al 0.023 % en PBS
* Solución buffer salina fosfatada (PBS)
* Metanol
* Safranina
Procedimiento
1. Obtener la muestra sanguínea puncionando con una lanceta la yema del dedo anular.
2. Depositar en un porta objeto la sangre completa o, en su defecto, el plasma, en un área de 15 x20 mm.
3. Incubar en cámara húmeda por un lapso de 60 minutos a 37 oC.
4. Eliminar elcoágulo rompiéndolo por la periferia con aguja y retirándolo del área, lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 hasta quitar el exceso de eritrocitos.
5. Agregar NBT al 0.023% en PBS pH 7.2 e incubar por 60 minutos a 37°C.
6. Al término de la incubación, lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 y fijarlo con metanol por 5 minutos.
7. Lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 y agregar safranina al 5%en PBS pH 7.2 e incubar t temperatura ambiente por 14 min.
8. Lavar con agua corriente secar y contar en el microscopio 200 células con el objetivo de inmersión.
9. Determinar el porcentaje de células que contienen gránulos azules en su citoplasma (células positivas).
Valores normales. Se toma como un valor normal aquellos mayores del 40%.
Aplicaciones clínicas
La reducción del NBTes una prueba útil para analizarla integridad metabólica de los neutrófilos ya que la falla en la reducción del colorante se asocia con enfermedad granulomatosa crónica por lo tanto los neutrófilos de estos pacientes no pueden dar muerte a ciertos microorganismos intracelulares ni generar radicales superóxido
Resultados
Al realizar el conteo al microscopio se contabilizaron arriba del 40% deneutrofilos por lo que se determino un resultado positivo aunado al cambio en el colorante.
Discusión
Los pasos de una fagocitosis, se puede dividir en: quimiotaxis, endocistosis o adherencia, ingestión, digestión o citopepsis y exocitosis.
Existen diversos métodos para evaluar la fagocitosis (in vivo e in vitro).
Una de estas es la reducción de NBT la cual nos indica si los neutrofilospueden o no dar muerte a ciertos microorganismos intracelulares ni generar radicales superóxido.
El azul de tetrazolio nitrado (NBT) que al reducirse forma el formazan, de color azul oscuro. Se relizó la prueba de reducción del Nitro Azul de Tetrazolio(NBT) por sus siglas en ingles, en el laboratorio de inmunología, en polimorfonucleares obtenido desuero humano, se evaluo la reducción de NitroAzul de Tetrazolio es un compuesto claro, amarillo y soluble en agua que al reducirse produce el formazan,
Los neutrófilos pueden reducir el colorante después de la ingestión de látex u otras partículas, subsecuente a la descarga metabólica generada por la vía derivada del monofosfato de hexosa esta ocurre que cuando compitiendo con el oxigeno, la molécula es reducida por este sistema hasta...
Introducción
La fagocitosis forma parte de la respuesta inespecífica uno de los mecanismo de defensa, esta se lleva a cabo por medio de dos series de células, la serie mieloide que incluye a los polimorfonucleares neutrofilos y linfocitica que incluye a los macrófagos.
Las células fagocíticas destruyen microorganismos a través de mecanismosdependientes de oxigeno, el primero incluye la participación de radicales libres, generados por el sistema NADPH-Oxidasa al transformar al oxigeno molecular en anión superóxido.
Las hidrolasas lisosomales se activan al acidificarse el medio fagosomal a través de la actividad de bomba de protones (ATPasa) presente en un tipo de endosomas, la actividad conjunta de los radicales libres y componenteslisosomales es la causa de muerte de los microorganismos ingeridos.
Objetivo:
Evaluar el índice fagocítico mediante la cuantificación del NBT analizando la integridad metabólica de los polimorfonucleares de suero humano.
Materiales y equipos
* Microscopio
* Incubadora
* Lancetas
* Jeringuillas y agujas
* Láminas portaobjeto
* Cámara húmeda
* Nitroazul detetrazolio al 0.023 % en PBS
* Solución buffer salina fosfatada (PBS)
* Metanol
* Safranina
Procedimiento
1. Obtener la muestra sanguínea puncionando con una lanceta la yema del dedo anular.
2. Depositar en un porta objeto la sangre completa o, en su defecto, el plasma, en un área de 15 x20 mm.
3. Incubar en cámara húmeda por un lapso de 60 minutos a 37 oC.
4. Eliminar elcoágulo rompiéndolo por la periferia con aguja y retirándolo del área, lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 hasta quitar el exceso de eritrocitos.
5. Agregar NBT al 0.023% en PBS pH 7.2 e incubar por 60 minutos a 37°C.
6. Al término de la incubación, lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 y fijarlo con metanol por 5 minutos.
7. Lavar el porta objeto con PBS pH 7.2 y agregar safranina al 5%en PBS pH 7.2 e incubar t temperatura ambiente por 14 min.
8. Lavar con agua corriente secar y contar en el microscopio 200 células con el objetivo de inmersión.
9. Determinar el porcentaje de células que contienen gránulos azules en su citoplasma (células positivas).
Valores normales. Se toma como un valor normal aquellos mayores del 40%.
Aplicaciones clínicas
La reducción del NBTes una prueba útil para analizarla integridad metabólica de los neutrófilos ya que la falla en la reducción del colorante se asocia con enfermedad granulomatosa crónica por lo tanto los neutrófilos de estos pacientes no pueden dar muerte a ciertos microorganismos intracelulares ni generar radicales superóxido
Resultados
Al realizar el conteo al microscopio se contabilizaron arriba del 40% deneutrofilos por lo que se determino un resultado positivo aunado al cambio en el colorante.
Discusión
Los pasos de una fagocitosis, se puede dividir en: quimiotaxis, endocistosis o adherencia, ingestión, digestión o citopepsis y exocitosis.
Existen diversos métodos para evaluar la fagocitosis (in vivo e in vitro).
Una de estas es la reducción de NBT la cual nos indica si los neutrofilospueden o no dar muerte a ciertos microorganismos intracelulares ni generar radicales superóxido.
El azul de tetrazolio nitrado (NBT) que al reducirse forma el formazan, de color azul oscuro. Se relizó la prueba de reducción del Nitro Azul de Tetrazolio(NBT) por sus siglas en ingles, en el laboratorio de inmunología, en polimorfonucleares obtenido desuero humano, se evaluo la reducción de NitroAzul de Tetrazolio es un compuesto claro, amarillo y soluble en agua que al reducirse produce el formazan,
Los neutrófilos pueden reducir el colorante después de la ingestión de látex u otras partículas, subsecuente a la descarga metabólica generada por la vía derivada del monofosfato de hexosa esta ocurre que cuando compitiendo con el oxigeno, la molécula es reducida por este sistema hasta...
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