practico de bioquimica 2012 glucosa

Practico de Bioquímica.
Objetivo 1:
Nuestro primer objetivo va ser estudiar los efectos de la glucólisis, la forma de hacerlo va ser analizando muestras de un cultivo de levadura preparado en un medio favorable para su crecimiento a base de extracto de levadura y glucosa e incubándolo en un horno a 30º C.
La glucólisis es un proceso por el cual los organismos vivosproducen 2 moléculas de piruvato el cual es el sustrato para otras vías de oxidación que generan energía para cumplir sus funciones vitales entre ellas la reproducción celular que será el medio por el cuál evaluaremos los efectos de la glucólisis.
Los cultivos que prepararemos se diferenciaran en que 2 tendrán la presencia de un inhibidor de la glucólisis y dos no, de este modo esperaremos que loscultivos libres de inhibidor crezcan más ya que se generara la energía necesaria para la reproducción celular lo contrario de lo que esperamos en los cultivos con inhibidor.
La forma de medir el crecimiento será evaluando la turbidez de las muestras por medio de un espectrofotómetro el cual a través de un haz de luz en esta caso a 600 nm mide la absorbancia de las muestras.
La turbidez entreostras cosas es provocada por la cantidad de células presentes por lo que mayor cantidad de células mayor turbidez y mayor será el valor de absorbancia de las muestras.
Esperamos que los valores de de absorbancia sean mayores en los cultivos que no se le suministro inhibidor de glucólisis.
Los muestras a evaluar serán tomadas a las horas 0, ½, 1, 2, 5, 24 de incubadas.
Muestras seleccionadas:Sin inhibidor Mesa 1
Con inhibidor Mesa 4
Presentación de Datos:
Mesa 1 Tiempo: 0 ½ 1 2 5 24
S/I Absorbancia: 0,287 0,256 0,304 0,329 0,254 0,398

Mesa 4 Tiempo: 0 ½ 1 2 5 24
C/I Absorbancia: 0,131 0,1020,307 0,321 0,063 0,352

Gráfico de Crecimiento del cultivo de Levadura.













Objetivo 2
Nuestro próximo objetivo será determinar el consumo de glucosa de los cultivos.
Para esto debemos primero pasar por otro objetivo, hallar elcoeficiente de extinción (ɛ) molecular de la glucosa.
Para esto realizaremos una curva de calibración la cual trata de estudiar la absorbancia de concentraciones conocidas de glucosa, los datos son graficados esperando que la curva trazada se ajuste a una recta de la cual el valor de la pendiente representa el valor de ɛ.
La expresión lineal de Lambert y Beer A= ɛ.c.l establece que para una sustanciadada y a una longitud de onda dada dejando constante l el único factor que hace variar la absorbancia es la concentración del soluto, esto nos permitirá luego de realizada la calibración determinar el consumo de glucosa de los cultivos con inhibidor y sin en el comparando la absorbancia de las concentraciones conocidas con la absorbancia de las muestras de nuestros cultivos que fueron previamentecentrifugadas para intentar separar las células de las solución y de esa manera que la absorbancia se de únicamente por la presencia de la glucosa.
Lo que se espera es que los cultivos sometidos al inhibidor den un valor de absorbancia cada vez mayor lo que indicara un menor consumo de glucosa inclusive sin errores esperados al realizar el experimento se de un consumo en los cultivos mas jóvenes yluego al no existir glucólisis y mueran, el valor de absorbancia se mantenga constante mostrando un no consumo de glucosa y en cuanto a los cultivos sin inhibidor se espera una absorbancia cada vez menor lo que indica mayor consumo de la glucosa la crecer los cultivos. Para entender mejor lo que representa los datos serán presentados gráficamente del cultivo con mayor tiempo de incubación al de...