Practico Laboratorio Enterobacterias

Práctico Nº 3

ENTEROBACTERIAS


Temario:
 Enterobacterias (Método de recuento en placa)
 Bacterias coliformes (Método de recuento en placa)
 Escherichia coli (Presencia/ Ausencia)

Fundamentos

A) Enterobacterias

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son gérmenes de forma bacilar, gramnegativos, anaerobios facultativos, noesporulados, que fermentan la glucosa, son citocromo oxidasa negativo y crecen en medios que contienen sales biliares.
Dentro de esta familia se encuentran algunos microorganismos que fermentan la lactosa y otros que no lo hacen.

Por ejemplo:
• No fermentadores de lactosa: incluye integrantes de los géneros Salmomella, Shigella, Proteus, Providencia, Yersinia, Morganella, otros.




•Fermentadores de lactosa: incluye integrantes de los géneros Escherichia coli, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, otros.

Las Enterobacterias son consideradas indicadoras de contaminación fecal. Se utilizan generalmente para señalar calidad sanitaria de alimentos procesados. Su presencia en niveles altos en estos productos puede indicar elaboración poco higiénica y/o contaminación posterior asu fabricación.


B) Coliformes (grupo coli-aerogenes)
Este grupo está constituido por las Enterobacterias lactosa-positiva, es decir, por aquellas que tienen la capacidad de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, a una temperatura de incubación de 35-37ºC.
Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales de sangre caliente,pero también en otros ambientes como el suelo, las plantas, cáscara de huevo, etc.
Se suelen utilizar como índice de contaminación fecal por su frecuencia en las heces y por su fácil detección en el laboratorio.
Dentro de este grupo son los coliformes fecales los que tienen mayor significado sanitario, un alto porcentaje de estos está constituido por E.coli.
Estos se características por su:
-Capacidad para desarrollar a 44 -45,5º
- Aptitud para crecer en presencia de sales biliares
- Facultad para producir indol en agua de peptona

En productos no procesados o con tratamiento insuficiente para eliminar la mayoría de las formas vegetativas, es preferible la búsqueda de coliformes o E.coli. como indicadores de contaminación fecal.

C) Escherichia coliEste microorganismo pertenece a la familia de las Enterobacteriaceae y al grupo Coliforme fecal.
Es un huésped constante del intestino del hombre y de los animales de sangre caliente. Su presencia en un alimento indica generalmente contaminación directa o indirecta de origen fecal. E.coli es un indicador clásico de la posible presencia de contaminantes entéricos en el agua, en moluscos, enlácteos y en otros alimentos.
La enumeración de este microorganismo en el agua constituye una medida del grado de polución, mientras que altos niveles detectados en otros alimentos pueden ser producto de una falta de higiene en la manipulación y un almacenamiento inadecuado.


Escherichia coli presenta las siguientes característica bioquímicas generales:
Indol (+), Rojo de Metilo (+),Voges Proskauer (-), Citrato de Simmons (-)










Materiales y método

A) Enterobacterias (Método de recuento en placa)

- Pesar 20 g representativos de muestra, en recipiente estéril.
- Añadir el diluyente (agua de peptona bufferada) hasta llegar a 200g finales
(10-1).
- Homogeneizar la mezcla.
- A partir de esta suspención realizar diluciones 10-2 , 10-3 y 10-4 conagua de peptona bufferada.
- Sembrar con pipeta estéril, 1ml de cada una de estas tres diluciones en placas estériles.
- Agregar a cada placa 12 ml de Agar VRBGA fundido y templado a 45º -50ºC.
- Dejar que se solidifique unos minutos, luego añadir otra capa de medio.
- Dejar solidificar nuevamente y luego guardar las placas en estufa.
- Incubar 24 hs a 37ºC. Leer los resultados.

Medio...