Preguntas de independencia
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS EXACTAS E INGENIERIAS
DEPARTAMENTO DE FARMACOBIOLOGIA
“Conservación y Mantenimiento de Hongos Fitopatógenos”
P
Dr. Gil Virgen Calleros
Asesor
M.C. María Eugenia Méndez Santillán
Guadalajara, Jal.
ANTECEDENTES
Mantener y conservar en buenas condiciones una colección de hongos, es una tarea que demandaconstante atención y vigilancia. Se debe conocer, no sólo lo que concierne a las características morfológicas, crecimiento, propiedades bioquímicas y fisiológicas de los hongos, sino también los requerimientos en cuanto a los métodos de preservación más favorables para su conservación y mantenimiento posterior. Esto es sumamente importante, ya que los objetivos primordiales que persigue laconservación de cepas de hongos son: pureza, viabilidad y estabilidad morfológica y genética. (PANIZO y Vera, 2005).
La primera colección de cultivos microbianos se estableció en 1880 en Praga, Viena, por Frántisek Král, quién tuvo una visiónión del Commonwealth Mycological Institute del Reino Unido, y en 1925 la de Estados Unidos (Amarican Type Culture Collection (ATCC)). Estas colecciones soninternacionalmente reconocidas y mantienen millones de cepas microbianas, algunas de ellas patentadas para procesos biotecnológicos. (González MsC, 2008).
El número de colecciones de cultivos se ha incrementado y actualmente existen 469 colecciones en 61 países registrados en el Centro de Datos Mundial de Microorganismos (WDCM). Pueden ser estatales, semi-gubernamentales, sustentadas poruniversidades, industrias o privadas; y pueden especializarse en las ramas: agrícola, forestal, marina, médica, veterinaria, industrial y otros (WDCM, 2002). Sin embargo existen muchas otras colecciones establecidas y que no están registradas en la WDCM.
No en totériles o tubos de vidrio con tapón de rosca y se dejarán solidificar. Las cajas y tubos de medio que se prepararán se deben manteneren refrigeración para su uso posterior.
Técnica de aceite mineral.
Es una técnica simple y efectiva para prolongar la conservación de muchos organismos. Consiste en cubrir completamente el cultivo después de su desarrollo en medio sólido, con una capa de aceite mineral o vaselina estéril. Los cultivos en esta forma se pueden conservar a temperatura ambiente o aún mejor en refrigeración porperíodos de varios años.
Teniendo preparados los tubos de vidrio con el PDAA y el hongo ya inoculado con la colonia madura
Se esteriliza el aceite mineral (parafina líquida, gravedad específica 0.830 – 0.890) dos veces a 121º C durante 15 min, se deja enfriar a temperatura ambiente. (Sosa- Moss, 1997)
Se cubre el cultivo con aceite mineral estéril aproximadamente 10 mm porarriba del nivel del agar. Si la profundidad del aceite es mayor el hongo no recibirá suficiente oxígeno y morirá, si es menor, el micelio y/o el agar expuesto a los lados del tubo permitirá la evaporación, provocando que el cultivo se seque. Después se etiquetan los tubos con los datos del hongo y la fecha de almacenamiento. Se guardarán los tubos, sin presionar demasiado el tapón de rosca engradillas a temperatura ambiente o en refrigeración.
Para evitar el deterioro de los cultivos almacenados, se transferirá el cultivo a intervalos de 2 años. Los periodos de viabilidad de los hongos almacenados son de 6 meses a 35 años dependiendo de las especies. (Teresa Mier, 2002).
Caracterización morfológica macroscópica
De los diversos aislamientos obtenidos se tomará con unsacabocados estéril, discos de micelio de 9mm de diámetro y se resembrarán en placas con PDAA, se incubarán a 25° C por 7 días. Transcurrido el periodo de incubación se caracterizaran las colonias, tomando en cuenta los siguientes parámetros: crecimiento radial en cm, color del reverso de la caja, abundancia y textura del micelio aéreo.
Cepas de hongos a preservar:
Fusarium sp
Trichoderma...
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