Preparación de un medio de cultivo

Universidad del Valle de México
Ciencias de la Salud
Lic. Químico Farmacéutico Biotecnólogo
Microbiología
Reporte práctica 6 “preparación de un medio de cultivo”
Autor:
Leonardo Sánchez
Guadalupe Morales
Libni Romero
Tercer semestre
Fecha de entrega: ______

ANALISIS DE RESULTADOS:
En esta práctica se elaboraron diferentes medios de cultivos donde cada equipo hizo uno diferente porlo que enseguida se mencionan el modo de preparación de cada una de ellas así como también sus componentes y su función de cada uno de ellos.
Verde Brillante Bilis 2% Caldo.
Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable.
Fórmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
  Bilis de buey deshidratada | 20.0 | Suspender 40 gdel polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Preparar además, el medio a doble concentración. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. |
  Lactosa | 10.0 | |
  Peptona | 10.0 | |
  Verde brillante | 0.0133 | |
pH final: 7.2 ± 0.2 |
Función de sus componentes:
En el medio de cultivo, la peptona aporta losnutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.
Simmons Citrato Agar
Medioutilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
Fórmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
Citrato de sodio | 2.0 | Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y esterilizar enautoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar en posición inclinada. |
Cloruro de sodio | 5.0 | |
Fosfato dipotásico | 1.0 | |
Fosfato monoamónico | 1.0 | |
Sulfato de magnesio | 0.2 | |
Azul de bromotimol | 0.08 | |
Agar | 15.0 | |
pH final: 6.9 ± 0.2 |
Función de sus componentes:
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodioes la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces deutilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medioalcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.
E. C. Medio.
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli en agua, alimentos y otros materiales.
Fórmula (en gramos por litro) |Instrucciones |
  Tripteína | 20.0 | Suspender 37,4 g del medio en un litro de agua destilada. Calentar hasta su total disolución. Distribuir en tubos de ensayo que contengan campanitas de Durham. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C. |
  Lactosa | 5.0 | |
  Sales biliares N° 3 | 1.9 | |
  Fosfato dipotásico | 4.0 | |
  Fosfato monopotásico | 1.5 | |
  Cloruro...