Preparacion de liposomas

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PREPARACIÓN DE LIPOSOMAS.

1. Justifique los pasos experimentales llevados a cabo para obtener los liposomas.
Disolver lecitina en mezcla de cloroformo-metanol: los liposomas son estructuras microscópicas, algunas compuestas de lecitina. Para que se de la formación de la bi-capa lipidica (formación de liposoma), se requiere que las cabezas de los lípidos se orienten hacia su entornopolar, mientras que las colas hidrofóbicas minimizan el contacto con este entorno. Las colas no polares de los lípidos tienden a juntarse, formando una bicapa lipídica o una micela. Con el cloroformo-metanol se tiene un sistema bifásico que permite la formación de los liposomas unilaminares.
Rotoevaporación a 65ºC: con el rotoevaporador se pretende eliminar la mezcla de cloroformo-metanol, seutilizan 65ºC ya que abarca las temperaturas de ebullición del cloroformo y el metanol, 62ºC y 65ºC respectivamente.
Adición de éter etílico y agitación en baño de hielo: el éter etílico es un buen disolvente para la lecitina, la baja temperatura permite que haya una disminución de la solubilidad de forma que la lecitina quede en suspensión.
Adición de un buffer: el control del pH en todo tipo dereacción es importante. En esta reacción se tiene una sustancia anfótera, por lo que variaciones en el pH generarían que la reacción se desviara hacia otros tipos de procesos como micelación o detergencia.
Sonicación: la sonicación consiste en aplicar ultrasonidos a una suspensión celular. Se transmite una corriente eléctrica a un sistema mecánico que la convertirá en vibraciones de alta intensidadgenerándose ondas de ultrasonido que generan millones de  burbujas microscópicas, las cuales se expanden y colapsan contra las células causando la ruptura de su membrana. Partiendo de que antes de sonicar se tiene un liposoma multilaminar, la formación de las vesículas se da gracias a la irradiación ultrasónica.
Rotoevaporar a temperatura ambiente: el éter etílico posee una temperatura deebullición muy baja, así, se elimina del sistema.
2. Consulte dos metodologías para la preparación de liposomas.
Las técnicas de preparación de liposomas son muy variadas e incluyen no sólo diferentes métodos de obtención sino también la correspondiente selección por tamaños, clasificándose de la siguiente forma: hidratación del fosfolípido y dispersión simple, sonicación, extrusión, métodos quemodifican el proceso de hidratación, congelación – descongelación, prensa de French, fase reversa, y ciclo de deshidratación controlada. El método de elección depende en cada caso del tipo de liposoma que se desea obtener, y su tamaño, influye también, el tipo de fosfolípido y la aplicación que se pretende.
El método de hidratación y dispersión simple consta de las siguientes etapas: disolucióndel lípido en un disolvente inorgánico, evaporación a presión reducida del solvente con movimiento rotatorio simultáneo, hasta obtener una película delgada y perfectamente seca en las paredes del matraz y adición de la fase acuosa y formación del MLV (liposomas multilaminares) mediante agitación.
Para la obtención de liposomas unilaminares a partir de MLV se pueden emplear los procedimientos desonicación, de la prensa de French y de la extrusión secuencial. El método aporta altos niveles de energía a la suspensión de lípidos, y es necesario lograr la exposición de MLV a la irradiación ultrasónica, siendo el método más frecuentemente usado para obtener pequeñas vesículas. La extrusión de membranas liposomales, permite reducir el tamaño de los liposomas, pasando éstos a través de unfiltro de membrana de poros de tamaño definido.
Existen métodos que modifican el proceso de hidratación para mejorar el porcentaje de encapsulación, uno de ellos es la congelación-descongelación. La técnica de congelación-descongelación consiste en someter una preparación de MLV a sucesivos ciclos de congelación, y descongelación en un baño termostato. En este caso se logra una mejor eficiencia...
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