produccion de nitrogeno en diferentes estados fisiologicos
Páginas: 5 (1076 palabras)
Publicado: 12 de abril de 2013
PRACTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
ELIMINACIÓN DE NITRÓGENO EN DIFERENTES ESTADOS FISIOLÓGICOS
OBJETIVO:
Cuantificar el nitrógeno total presente en la orina de estudiantes voluntarios y correlacionarlo con el consumo de dietas pobres y ricas en proteína.
INTRODUCCIÓN.
Se recurrirá al método de que utiliza la especificidad de la reacción de la ureasa con un procedimientocolorimétrico (reacción de Berthelot) muy sensible para la determinación de amoniaco.
PROCEDIMIENTO.
Para la muestra M1, será un estudiante voluntario que consumirá solamente sales de rehidratación durante las 24 horas anteriores a la toma de la muestra, para tal efecto, al comenzar el día anterior a la práctica desde el momento de levantarse no deberá consumir ningún alimento, solo suerocasero durante todo ese día. Finalmente al levantarse el día de la práctica, recolectará una muestra de unos 20 mL de orina aproximadamente y la mantendrá en la nevera a 4ºC hasta que sea procesada en el laboratorio, después de esto podrá desayunar normalmente.
La muestra M2, será la de un estudiante que haya consumido dieta rica en proteínas durante las 24 horas anteriores a la práctica, Para esteefecto el estudiante voluntario comerá una clara de huevo por cada 12 kg de peso corporal con el desayuno normal, una clara de huevo por cada 10 kg de peso corporal con el almuerzo normal y otra clara de huevo por cada 12 kg de peso corporal con la comida normal (adicionalmente a lo que normalmente come).. Al día siguiente recogerá 20 mL de muestra de orina, la guardará n la nevera a 4ºC hasta quesea procesada en el laboratorio y volverá a su dieta normal.
La muestra M3 será la de un estudiante que haya consumido su dieta normal (sin excederse en el consumo de proteínas como huevos, carne, pescado o leguminosas como frijol, arveja, lenteja o garbanzos) y el día de la practica recogerá su muestra de orina al levantarse y la mantendrá en la nevera a 4ºC hasta que sea procesada en ellaboratorio..
1. Para determinar en N ureico + N amoniacal se diluye la orina 1:10 con agua. (1 ml de orina + 9 ml de agua)
2. Se toman 8 tubos de ensayo y se procede como indica la siguiente tabla
Componente
(ml)
T1
T2
T3
T4
B
M1
M2
M3
Ureasa
Agua
Orina
Patrón 1 N ureico
Patrón 2 N ureico
Patrón 3 N ureico
Patrón 4 N ureico
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
3. Todos los tubos, se incuban durante 15 minutos a 37ºC.
4. Se añade a todos los tubos en rápida sucesión 4 ml de solución de fenol-nitroprusiato y 5 ml de solución alcalina diluida de hipoclorito. Se agregan en orden y se mezclan bienal terminar.
5. se colocan los tubos en el baño a 37ºC durante 20 minutos para que se desarrolle el color
6. Se lee absorbancia a 560 nm contra el blanco de referencia.
INFORME (para bitácora)
Sustente debidamente las respuestas a los siguientes interrogantes
A. Análisis de resultados.
1. Grafique los resultados correspondientes a la determinación espectrofotométrica
2. Realicelos cálculos respectivos y determine la concentración de nitrógeno ureico en la muestras de orina que le correspondió analizar.
3. Están estos valores de acuerdo con lo esperado? De las explicaciones correspondientes
4. Que resultados esperaría en un paciente que presente insuficiencia renal?
B. Cuestionario
1. Describa el fundamento del método de Berthelot para la determinación denitrógeno ureico y amónico.
2. Cuál es la diferencia entre nitrógeno ureico y nitrógeno amoniacal
3. Que significado biológico tiene el encontrar elevados niveles de nitrógeno ureico y/ nitrógeno amoniacal en la orina
4. Describa en que forma el organismo humano produce y excreta nitrógeno ureico y nitrógeno amoniacal
5. Describa la patogénesis de dos enfermedades relacionadas con la excreción...
ELIMINACIÓN DE NITRÓGENO EN DIFERENTES ESTADOS FISIOLÓGICOS
OBJETIVO:
Cuantificar el nitrógeno total presente en la orina de estudiantes voluntarios y correlacionarlo con el consumo de dietas pobres y ricas en proteína.
INTRODUCCIÓN.
Se recurrirá al método de que utiliza la especificidad de la reacción de la ureasa con un procedimientocolorimétrico (reacción de Berthelot) muy sensible para la determinación de amoniaco.
PROCEDIMIENTO.
Para la muestra M1, será un estudiante voluntario que consumirá solamente sales de rehidratación durante las 24 horas anteriores a la toma de la muestra, para tal efecto, al comenzar el día anterior a la práctica desde el momento de levantarse no deberá consumir ningún alimento, solo suerocasero durante todo ese día. Finalmente al levantarse el día de la práctica, recolectará una muestra de unos 20 mL de orina aproximadamente y la mantendrá en la nevera a 4ºC hasta que sea procesada en el laboratorio, después de esto podrá desayunar normalmente.
La muestra M2, será la de un estudiante que haya consumido dieta rica en proteínas durante las 24 horas anteriores a la práctica, Para esteefecto el estudiante voluntario comerá una clara de huevo por cada 12 kg de peso corporal con el desayuno normal, una clara de huevo por cada 10 kg de peso corporal con el almuerzo normal y otra clara de huevo por cada 12 kg de peso corporal con la comida normal (adicionalmente a lo que normalmente come).. Al día siguiente recogerá 20 mL de muestra de orina, la guardará n la nevera a 4ºC hasta quesea procesada en el laboratorio y volverá a su dieta normal.
La muestra M3 será la de un estudiante que haya consumido su dieta normal (sin excederse en el consumo de proteínas como huevos, carne, pescado o leguminosas como frijol, arveja, lenteja o garbanzos) y el día de la practica recogerá su muestra de orina al levantarse y la mantendrá en la nevera a 4ºC hasta que sea procesada en ellaboratorio..
1. Para determinar en N ureico + N amoniacal se diluye la orina 1:10 con agua. (1 ml de orina + 9 ml de agua)
2. Se toman 8 tubos de ensayo y se procede como indica la siguiente tabla
Componente
(ml)
T1
T2
T3
T4
B
M1
M2
M3
Ureasa
Agua
Orina
Patrón 1 N ureico
Patrón 2 N ureico
Patrón 3 N ureico
Patrón 4 N ureico
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
1.00
0.01
3. Todos los tubos, se incuban durante 15 minutos a 37ºC.
4. Se añade a todos los tubos en rápida sucesión 4 ml de solución de fenol-nitroprusiato y 5 ml de solución alcalina diluida de hipoclorito. Se agregan en orden y se mezclan bienal terminar.
5. se colocan los tubos en el baño a 37ºC durante 20 minutos para que se desarrolle el color
6. Se lee absorbancia a 560 nm contra el blanco de referencia.
INFORME (para bitácora)
Sustente debidamente las respuestas a los siguientes interrogantes
A. Análisis de resultados.
1. Grafique los resultados correspondientes a la determinación espectrofotométrica
2. Realicelos cálculos respectivos y determine la concentración de nitrógeno ureico en la muestras de orina que le correspondió analizar.
3. Están estos valores de acuerdo con lo esperado? De las explicaciones correspondientes
4. Que resultados esperaría en un paciente que presente insuficiencia renal?
B. Cuestionario
1. Describa el fundamento del método de Berthelot para la determinación denitrógeno ureico y amónico.
2. Cuál es la diferencia entre nitrógeno ureico y nitrógeno amoniacal
3. Que significado biológico tiene el encontrar elevados niveles de nitrógeno ureico y/ nitrógeno amoniacal en la orina
4. Describa en que forma el organismo humano produce y excreta nitrógeno ureico y nitrógeno amoniacal
5. Describa la patogénesis de dos enfermedades relacionadas con la excreción...
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