Propiedades Fisicoquimicas De Las Proteinas

PROPIEDADES FISICOQUIMICAS DE LAS PROTEINAS
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES:
3 vasos de precipitado de 400 ml
1 frasco de vidrio de 250 ml
20 tubos de ensaye de 18 x 150 mm
4 tubos de ensaye de 13 x 100 mm
1 piceta con agua destilada
1 agitador de vidrio
2 pipetas graduadas de 10 ml
2 pipetas graduadas de 1ml
2 gradillas metálicas
1 pinzas para tubos de ensaye
1 mechero, 1 tripie,1 tela de asbesto
( que fue sustituido por calienta biberones)
1 tubo de papel celofán (tripa de chorizo)
Papel hidryon
REACTIVOS

GELATINA AL 3 % p/v
ALBUMINA DE HUEVO AL 3% p/v
CASEÍNA AL 3% p/v
GELA TINA AL 2% p/v pH 09.0
AGUA DESTILADA A pH =7.0
ACIDO TRICLOROACETICO SATURADO
ACIDO PICRICO AL 20% p/v
ACETATO DE POMO AL 8% p/v
CLORURO MERCURICO 0.2 M
REACTIVO DE BIURETNaOH 0.1 M
CLOROFORMO
ACETONA
BUFFER DE ACETATOS 0.1 M pH=4.5

METODOS

1 PRUEBA DE BIURET: verter 10 gotas de proteína en los tubos de ensaye de 13 x 100 mm, adicionar 10 gotas del reactivo Biuret en cada tubo, mezclar. Observar el color desarrollado.

2 DESNATURALIZACION POR CALOR: colocar una serie e tubos de ensaye de 18 x 150 mm en una gradillametálica, adicionar a cada uno 2 ml de las soluciones de proteína, adicionar 1 ml de buffer acetato . introducir los tubos en baño de agua hirviente durante 10 minutos, dejar enfriar y anotar las observaciones.

DESNATURALIZACION POR SOLVENTES ORGANICOS: En una serie de tubos de ensaye de 13 x 100 mm, depositar 20 gotas de la solución de proteína. Agregar 10 gotas de cloroformo, mezclar y anotar loocurrido.
Preparar una serie de tubos de ensaye de 13 x 100 mm y agregarles 20 gotas de las soluciones proteicas, adicionar 20 gotas de acetona, agitar suavemente y describir los cambios ocurridos en la solución.

PRECIPITACION POR ANIONES: en una serie de tubos de ensaye de 13 x 100 mm transferir 20 gotas de las soluciones proteicas, agregar 10 gotas de la solución de acido tricloroaceticosaturado, mezclar suavemente y anotar los cambios observados.
En otra serie de tubos, depositar 20 gotas de las soluciones de proteínas, añadir 10 gotas de acido pícrico, mezclar y anotar las observaciones.

PRECIPITACION POR CATIONES: preparar 2 series de tubos de ensaye con 20 gotas de la solución proteica respectivamente, agregar a todos los tubos de ensaye 5 gotas de NaOH. Agitar. A la primeraserie de tubos agregar 2 gotas de acetato de plomo y a la segunda 2 gotas de cloruro de mercúrico, agitar los tubos y registrar los cambios ocurridos.

DIALISIS:
A) Cortar un tubo de celofán de 25 cm de longitud, humedecer con agua destilada y atar cuidadosamente un extremo sobre si mismo.
B) Transferir al interior del celofán 10 ml de albumina y atar el otro extremo dejando un espacioantes del nudo.
C) Introducir la bolsa de diálisis en un vaso de precipitado de 400 ml lleno con agua destilada, y dejarlo así durante 60 min.
D) Correr un blanco de la siguiente manera: en una bolsa de celofán preparar como se indico anteriormente, depositar 10 ml de agua destilada en el interior del tubo de celofán y cerrarla.
Sumergirla en un frasco conteniendo 50 ml de albumina ymantenerla en esas condiciones durante 60 min.
E) Al transcurrir el tiempo indicado, llevar a cabo la prueba de Biuret tanto al liquido exterior, como al liquido interior del tubo de celofán. Proceder de la misma manera con el experimento control. registrar los colores desarrollados en las cuatro pruebas.

EQUILIBRIO DE DONNAN:
A) Humedecer con agua destilada un tubo de celofánde 25 cm de longitud, atarlo por uno de sus extremos.
B) Depositar con una pipeta 20 ml de gelatina, en el interior del tubo y agregar 10 gotas de fenoftaleina. Anotar el color que toma la solución. Atar el otro extremo de la bolsa y asegurarse de que este bien cerrada.
C) En un frasco de vidrio de boca ancha depositar 20 ml de agua destilada y adicionar 10 gotas de fenoftaleina,...