Proteínas

INTRODUCCIÓN.

En el siguiente informe sobre el laboratorio nº 4 de bioquímica se presenta el procedimiento a seguir en el método de extracción de la proteína de la leche, llamada caseína, en donde se indica con detalles, cada uno de los pasos a seguir más los resultados finales obtenidos al final del práctico.
La leche contiene vitaminas, minerales, proteínas, carbohidratos y lípidos. Lasproteínas son compuestos químicos muy complejos que se encuentran en todas las células vivas como lo son la sangre, la leche, los huevos y en toda clase de semillas y pólenes. Estas macromoléculas están compuestas principalmente por un alto porcentaje de nitrógeno, oxígeno, hidrógeno y carbono, también en una mayoría existe un menor porcentaje de azufre, fósforo y hierro.
La caseína de la leche esuna proteína del tipo fosfoproteína que se separa de la leche por acidificación, generándose un precipitado blanco, esto representa entre un 77% y un 82% de las proteínas presentes en la leche y un 2.7% de la composición de la leche líquida. No presenta sabor ni aroma y es insoluble en agua. Se dispersa bien en un medio alcalino como por ejemplo NaOH, formando caseinato de sodio.( )
Para poderrealizar la extracción de la proteína se siguió una serie de procesos en donde se le aplico reactivo de Biuret al precipitado final.
El método de Biuret es donde aquellas sustancias que contienen dos o más enlaces peptídicos, reaccionan con sulfato de cobre alcalino, se forma un complejo de color púrpura. El color resulta de la coordinación de los átomos de nitrógeno peptídicos con los iones deCu++. La intensidad del color depende de la concentración de proteína. ( )
Posterior a esto, el producto final es introducido en un espectrofotómetro, donde se analiza de manera más exacta la concentración de la proteína en la muestra. La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar laradiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.( )

Objetivos Generales:
* Llevar a cabo la extracción de la proteína primaria de la leche.
* Cuantificación de proteínas totales por el metido de Biuret

Objetivos Específicos:
* Realizar el método de centrifugación deuna manera eficiente.
* Utilizar de manera eficaz el reactivo de Biuret.

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MATERIALES
* Probeta

* Vaso precipita de 100 ml

* Gotario plástico

* Centrifuga

* pH metro

* Tubo de ensayo

* Tubo cónico

* Electrodo

* Curva de calibración

* Espectrofotómetro

* Cubeta

REACTIVOS
* NaOH 0.01M

* HCl 2%

* Leche descremada* H2O destilada

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PROCEDIMIENTO.

Se dispuso 5 ml de leche descremada en un vaso precipitado de 100 ml, al cual se agregó mediante una probeta de 50 ml, una cantidad de 25 ml de agua destilada. Luego se agita la mezcla para obtener un mejor resultado en la extracción de la proteína primaria de la leche (caseína).
Posteriormente se fueron agregando gotas hasta alcanzar un pH de 4,5(pH optimo para la extracción de la proteína) con un total de 7 gotas de HCl al 2% a la muestra; luego de alcanzar el pH optimo se dejo reposar la mezcla a temperatura ambiente para obtener un precipitado.
Ya precipitada la muestra fueron extraídos 14 ml de la solución, los cuales fueron dispuestos en un tubo cónico, para proceder al método de centrifugación (el cual duró 4 minutos) yatranscurrido el tiempo se tomó la muestra de la centrifuga para extraer el sobrenadante de la solución. Se procedió a realizar el mismo procedimiento, luego de haber agregado el sobrante de la muestra al tubo cónico.
Al finalizar el método de centrifugación se vuelve a eliminar el sobrenadante, para luego resuspender 5ml de NaOH a 0.01M para homogenizar la muestra. Se extrajo 1 ml de muestra y se...