proteina

ruebas Cualitativas para Aminoácidos y Proteínas


Objetivos:
Aplicar pruebas cualitativas generales y específicas que permitan reconocer grupos químicos de los aminoácidos y proteínas.

Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y químicos.


Marco Teorico
Prueba de la ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).
Todas aquellas sustancias que presentan almenos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo o amarillo. Debido a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica, aparentemente debido a una oxidación y reducciónintramolecular de la ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a amarillo.
Prueba xantoprotica:
Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también darán lareacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos
Prueba de Biuret:
Es una prueba general para polipéptidos y proteínas ya que sirve para reconocer las uniones peptidicas. La positividad se manifiesta por la aparición de una coloración violeta. La formación de un complejo de coordinación entre los cationes cúpricos en medioalcalino con las uniones peptídicas.
REACCIÓN DE LA CISTINA:
Esta reacción dará positiva con aquellos aminoácidos que presenten azufre en su estructura, como son la cistina, la cisteina y la metionina. La reacción consiste en someter la muestra a una hidrólisis alcalina con hidróxido de sodio.
R-SH + 2 NaOH - R-OH + SNa2 + H2O
REACCIÓN DEL TRIPTOFANO:
El grupo indol del aminoácidotriptófano se condensa con el ácido glioxílico del reactivo, formando compuestos coloreados. El agregado de una pequeña cantidad de ácido sulfúrico concentrado puro, aumenta la sensibilidad de la reacción.
En este caso el precipitado fue la formación de un anillo color morado en la superficie de separación, reacción positiva.
Desnaturalización por calor y pH extremos:En bioquímica, la desnaturalizaciónes un cambio estructural de las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades físico-químicas.
Factores desnaturalizantes:

Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes,disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica). Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en:
La polaridad del disolvente.
La fuerza iónica.
El pH.
La temperatura.
Reacción del ácido glioxílico para triptófano: El grupo indólico del triptófano reacciona con ácido glioxílico en presencia de ácido sulfúricoconcentrado dando un complejo de color púrpura. El ácido acético glacial que ha sido expuesto a la luz contiene ácido glioxílico.
Prueba para Arginina: El aa. Arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color rojo.
Precipitación con cationes y aniones pesados ysales concentradas: Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son muy usados en la separación de proteínas y en la preparación de filtrados libres de proteínas. A pH neutro por lo general las proteínas tienen carga neta negativa y se combinan fácilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la carga producen la precipitación. A pH por debajo del punto...