Protocolo Analisis De Carbohidrtaos En Suelos Marinos
Páginas: 3 (734 palabras)
Publicado: 10 de julio de 2011
Análisis de Carbohidratos Totales en Sedimentos Marinos
1.-FUNDAMENTO TEÓRICO:
Los niveles de carbohidratos totales se han determinado de acuerdo con el método colorimétrico de Dubois et al.(1956). Este método se basa en una deshidratación (en presencia de ácido sulfúrico) de azúcares en derivados furfural y una condensación de esta última con fenol, que conduce a un color rosa salmón. Laintensidad de la coloración se mide por espectrofotometría a 490nm. Las densidades ópticas resultantes se transforman en concentraciones en comparación con un estándar de glucosa.
2.- MATERIALES EINSTRUMENTOS:
- Pipetas volumétricas de 2mL, 5 mL y 20mL
- Micropipeta de 1mL (1000uL)
- Tubos de ensayo de 20 x 150mm
- Centrífuga
- Espectrofotómetro de doble haz de luz UV/Visible.
3.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
3.1-Reactivos:
• Ac. Sulfúrico concentrado
• Solución Fenol (5%): Pesar 25g. De Fenol y diluirlo en 500mL de agua destilada.
• Solución estándar deGlucosa: Pesar 10mg de glucosa y diluirlo en 100mL de agua destilada.
3.2-Muestras:
Las muestras deben ser secadas a 105° C por 2 horas y molidas para que pasen a través de un tamiz de 150um(0.15mm), finalmente codificar según la estación y profundidad.
3.3.- Determinación del máximo de absorción:
Se debe realizar un barrido en el espectro visible desde 400 a 600nm para saber a quelongitud de onda se tiene el máximo de absorbancia. El valor teórico es de 490nm, en la Fig. 1. se muestra el espectro característico de la glucosa después de la reacción de coloración indicada por Dubois.[pic]
Fig. 1 Espectro de la glucosa después de la coloración usando el método de Dubois.
3.4.- Curva de calibración:
En 7 viales con tapa, agregar 1, 2, 3, 5, 7, 10, 20 mL de la soluciónestándar de glucosa, completar con suficiente agua hasta un volumen de 20ml. Tomar alícuotas de 2 mL (usar micropipetas) y colocarlos en otros tubos de ensayo, a los cuales se les agrega las siguientes...
1.-FUNDAMENTO TEÓRICO:
Los niveles de carbohidratos totales se han determinado de acuerdo con el método colorimétrico de Dubois et al.(1956). Este método se basa en una deshidratación (en presencia de ácido sulfúrico) de azúcares en derivados furfural y una condensación de esta última con fenol, que conduce a un color rosa salmón. Laintensidad de la coloración se mide por espectrofotometría a 490nm. Las densidades ópticas resultantes se transforman en concentraciones en comparación con un estándar de glucosa.
2.- MATERIALES EINSTRUMENTOS:
- Pipetas volumétricas de 2mL, 5 mL y 20mL
- Micropipeta de 1mL (1000uL)
- Tubos de ensayo de 20 x 150mm
- Centrífuga
- Espectrofotómetro de doble haz de luz UV/Visible.
3.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
3.1-Reactivos:
• Ac. Sulfúrico concentrado
• Solución Fenol (5%): Pesar 25g. De Fenol y diluirlo en 500mL de agua destilada.
• Solución estándar deGlucosa: Pesar 10mg de glucosa y diluirlo en 100mL de agua destilada.
3.2-Muestras:
Las muestras deben ser secadas a 105° C por 2 horas y molidas para que pasen a través de un tamiz de 150um(0.15mm), finalmente codificar según la estación y profundidad.
3.3.- Determinación del máximo de absorción:
Se debe realizar un barrido en el espectro visible desde 400 a 600nm para saber a quelongitud de onda se tiene el máximo de absorbancia. El valor teórico es de 490nm, en la Fig. 1. se muestra el espectro característico de la glucosa después de la reacción de coloración indicada por Dubois.[pic]
Fig. 1 Espectro de la glucosa después de la coloración usando el método de Dubois.
3.4.- Curva de calibración:
En 7 viales con tapa, agregar 1, 2, 3, 5, 7, 10, 20 mL de la soluciónestándar de glucosa, completar con suficiente agua hasta un volumen de 20ml. Tomar alícuotas de 2 mL (usar micropipetas) y colocarlos en otros tubos de ensayo, a los cuales se les agrega las siguientes...
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