Protocolo para evaluación de rhizobium en semillas de pimentón

Protocolo para evaluación de Rhizobium en semillas de pimentón (Capsicum annuum) y maíz (Zea mayz).

Origen material microbiológico
Utilizar aislamientos bacterianos previamente obtenidos de larizosfera de Brachiaria decumbens, B. humidicula, Phaseolus vulgaris y theobroma cacao, entre las plantas de interés agropecuario y Ageratum sp., Iresine herbotit, Piptadenia sp. y bacharis sp. entrelas plantas silvestres y un aislamiento bacteriano obtenido del interior de semillas de lechuga.
Caracterización morfológica, fisiológica y bioquímica de Rhizobium.
Para caracterizar las bacteriasfísicamente, estas se deben observar al microscopio con la prueba de gram, la motilidad en gota pendiente, la presencia de capsula con tinción negativa y la presencia de volutina con azul de metilenodiluido.
Para diferenciar Rhizobium, utilizar el medio de ELMARC, agar glucosa peptona purpura de bromocresol (GPA) y agar extracto de levadura manitol azul de bromotinol (ELMABAT).
Las pruebasbioquímicas empleadas para la caracterización posterior del aislamiento, son las siguientes: la actividad de la catalasa utilizando el peróxido de hidrogeno como sustrato, la tolerancia salina se evalúa segúnel crecimiento en medio de cultivo liquido al 2, 3 y 5% de NaCl, la disolución de fosfatos utilizándose los medios MM (medio mínimo), manita, ELMARC y Nfb-glucosa, sustituyendo la fuente soluble defosfato por HA (hidroxiapatita), fosfatos de hierro (FePO4) y de aluminio (AlPO4), según fuese el caso. Para esto, sembrar en el medio solido 5μl del inoculo en fase de crecimiento exponencial yobservar, a partir de las 24h durante 5 días, la presencia de crecimiento y/o formación de un halo de disolución de fosfatos.
Preparación de los inóculos bacterianos.
Las cepas a utilizar como inóculos semantienen activas mediante la siembra en el medio de cultivo solido y especifico favorable para su crecimiento, esto se indica anteriormente. Para la producción del inoculo, sembrar en matraz...