Prubas bioquiimicas

Pruebas bioquímicas
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son suficientemente distintivas o diferenciales. En el laboratorio disponemos de numerosas técnicas para la caracterización bioquímica de una especie.
Además de los productos finales de los procesos metabólicos, también se necesitaconocer con detalle como se producen estos cambios, como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas intervienen, cuales son los productos intermediarios además de que se deben reconstruir las secuencias de las reacciones bioquímicas que tienen lugar dentro de la célula.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato ydespués de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido.

Kligler Hierro Agar
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.

Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones: Suspender 54.8 g del polvopor litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121 C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Peptona de carne: 13.0
Cloruro de sodio: 5.0
Lactosa: 10.0
Tripteina: 10.0
Glucosa: 1.0
Citrato de hierro y amonio: 0.5
Tiosulfato desodio: 0.3
Rojo de fenol: 0.025
Agar: 15.0
pH final: 7.3 0.2
Fundamento
•En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
•La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables.
•El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de
ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, esla fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro.
•El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico. El agar es el agente solidificante.
•Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medioácido.
•El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro
de hierro de color negro

Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, ylactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido
Sulfhídrico

Características del medio
Medio preparado: rojo

TSI Agar
Medio universalmenteempleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones: Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo.Esterilizar a 121 C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Extracto de carne: 3.0
Pluripeptona: 20.0
Cloruro de sodio: 5.0
Lactosa: 10.0
Sacarosa: 10.0
Glucosa: 1.0
Sulfato de hierro y amonio: 0.2
Tiosulfato de sodio: 0.2
Rojo de fenol: 0.025
Agar: 13.0
pH final: 7.3 0.2
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
aportan los...