Prueba de FISH (hibridación fluorescente in situ




Tema: Prueba de FISH (hibridación fluorescente in situ)







Índice


Introducción


Objetivos

Cuerpo o contenido

Conclusiones


Anexos


Bibliografía





Introducción
La Hibridación Fluorescente In Situ, también llamada FISH, es un método de diagnóstico genético que consiste en usar una sonda de ADN (un segmento de ADN de cadena sencilla marcado con unfluorocromo o fluoróforo), el cual hibrida a una región específica del genoma de interés. De esta manera se pueden identificar pequeñas deleciones o duplicaciones al interior de un cromosoma. Con el FISH se puede hacer el diagnóstico de padecimientos humanos no visibles en el cariotipo convencional y también una diversidad de cánceres y leucemias.
La técnica consiste en preparar cortassecuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. Estas sondas se "marcan" con moléculas fluorescentes [p.ejemplo con biotina) o fluoresceína]. Estas sondas se hibridan o unen al DNA complementario y, como estan marcadas con moléculas fluorescentes, permiten localizar las secuencias en las que se encuentran. Adiferencia de otras pruebas utilizadas para estudiar los cromosomas que requieren que las células se encuentren en división activa, la hibridación fluorescente in situ puede ser llevada a cabo en células no activas
La FISH utiliza tres tipos de sonda:
Sondas específicas de un locus: estas sondas se hibridan a una región particular de un gen. Esta sonda es útil cuando se ha aislado una pequeña parte deun gen y se quiere averiguar en qué cromosoma se encuentra.
Sondas alfoides o centromericas: son sondas que contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrómeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta, con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el númerocorrecto de cromosomas o si tiene un cromosoma extra.
Sondas para cromosomas completos: son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerías de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral. De esta manera, se consiguen imágenes
Sondas para cromosomascompletos: son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerías de sondas, se puede marcar todo un en color que permiten examinar los cariotipos de una forma más exacta que los tradicionales cariotipos basados en bandas más o menos oscuras. Esta técnica es particularmente útil paraexaminar anormalidades cromosómicas
Esta metodología es útil para cuantificar aberraciones numéricas, tanto si se presentan o no en clones de baja expresión o baja capacidad proliferativa y para monitorizar clones hiperdoploides en leucemia linfoblástica aguda. Otra aplicación de la FISH es en el seguimiento de pacientes con un transplantealogénico de distinto sexo. Información rápida delporcentaje de células del donante y células residuales del receptor.





















Objetivos


Describir una panorámica del método FISH
Aplicaciones de la técnica FISH a los diagnósticoshematológicos.

Caracterización e identificación de anomalías genéticas en pacientes que padecen el trastorno así como la detección de portadores.








FISH (Hibridaciónfluorescente in situ)
La hibridación fluorescente in situ es una técnica citogenética de marcaje de cromosomas mediante la cual estos son hibridados con sondas que emiten fluorescencia y permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas así como de las anomalías que puedan presentar. Los cromosomas que son usualmente analizados por FISH son los 13, 18, 21, X e Y, que son los más...