Pruebas Bioquímicas

INTRODUCCIÓN
Hay ocasiones en las que no se conocen ciertas bacterias con las que se trabaja o encuentras, por esta razón existen pruebas de identificación bacteriana de distintos tipos, algunas de estas pruebas son llamadas “Pruebas Bioquímicas”, las cuales nos ayudan a identificar a las bacterias a partir de algunos rasgos específicos de estas, como son, su metabolismo, su morfología o suactividad enzimática. (Tortora, 2007)
Es importante mencionar que para la realización de algunas de estas pruebas se inocula en medio sólido (agar contenido en tubos de ensayo) y algunas otras en medio liquido (caldos). Estas pruebas se debe realizar una siembra por estría, que consiste en usar el asa de cultivo esterilizada introduciéndola en una muestra preferentemente liquida para despuésinocular en un medio de cultivo sólido haciendo como una especie de “S” en el cultivo. (Roger, et al. 2005)
Por otro lado otras de estas pruebas se realizaron inoculando poniendo simplemente una gota de la muestra en los medios de cultivo líquidos y finalmente se inocula los restantes por punción, la cual consiste en meter una aguja bacteriológica previamente esterilizada, en la muestra delmicroorganismo que se desea inocular y después se introduce en el medio de cultivo que debe ser medio sólido introduciendo la aguja en el fondo y jalando hacia la superficie.(Koneman, et al. 2008)
Existen diversas pruebas bioquímicas para la identificación bacteriana, sin embargo en esta práctica se emplearon únicamente 8 de estas, además de la que se realizo de observación al microscopio con ayuda de unatinción gram, algunas de estas se describirán a continuación:
1. Hidrólisis de Almidón
Esta prueba nos ayuda a determinar la presencia de la enzima amilasa, que ayuda a la degradación del almidón que es un homopolosacárido de glucosa, la forma en la que esta enzima degrada el almidón ocurre cuando la amilasa hidroliza los enlaces glucosidicos alfa1-4 liberando maltosa e isomaltosa, que semetabolizan por la célula. Si se determina que el organismo produce amilasa se puede diferenciar entre las especies de bacillus, streptococcus y lactobacillus.(Rodríguez, et al., 2006)
Según Evelyn Rodríguez y demás autores en su libro “Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio” explica que la hidrólisis de almidón se realiza de la siguiente manera:
Se divide en sectores la caja Petripreviamente preparada con agar nutritivo con almidón.
Se hace una inoculación por estría.
Se incuba a 35°C por 48 horas.
Finalmente, después de la incubación se cubre la superficie con solución de yodo para observar la apariencia que adquiere el agar.
La forma en la que se sabe si la prueba resulta positiva o negativa, se detrmina por la aparición de una silueta blanca alrededor de la estría,si está aparece la prueba resulta positiva. (MacFaddin, 2003)

2. Prueba en agar Triple Azucar y Hierro(Medio TSI)
Este tipo de agar es un medio de cultivo diferencial ya que solo desarrolla bacterias que fermentan glucosa, sacarosa y lactosa, así como la presencia de las que liberan ácido sulfhídrico. Cuando ocurre la fermentación de la glucosa el agar se hace ácido lo cual produce laaparición de un ennegrecimiento del amarillo habitual del agar. Las bacterias que suelen dar positivo en esta prueba se definen como enterobacterias Es importante mencionar que el medio debe de solidificar en forma de pico de flauta y se inocule por picadura. (Koneman, et al. 2008)
La forma en la que se realiza esta prueba según MacFaddin es la siguiente:
Se realiza la inoculación por punción, auqnuetambién puede hacerse por estría.
Se incuba a 37°C por 24 horas.
Se observan los cambios.
Como ya se menciono anteriormente la forma en la que se puede saber si la prueba dio positivo es si se observa un ennegrecimiento en el agar, sin en embargo esto solo confirma que si hubo liberación de ácido sulfhídrico, para saber si hubo fermentación de glucosa y sacarosa, debe observarse si el fondo...