Pruebas bioquimicas de enterobacterias

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a) PRUEBA DE FERMENTACION DE LA GLUCOSA Y LA LACTOSA
AGAR KLIGER HIERRO
Principio: Se basa en la capacidad de fermentación de dos azucares: glucosa y lactosa, en la producción de ácido Sulfhídrico (H2S) y en la producción de gas (CO2 y H2).
TÉCNICA
Siembre el Agar, haciendo una punción central hasta el fondo del tubo y estría en superficie.
Lectura: se efectúa después de 18 a 24 horas deincubación a 37°C.
La lectura se interpreta como un quebrado, la reacción ocurrida en la superficie del medio corresponde al numerador (parte aerobia) y la reacción ocurrida en la profundidad del medio corresponde al denominador (parte anaerobia) La acidez se denomina con la letra A (color amarillo) y la alcalinidad con la letra K (color rojo)
Fundamento: En el medio vamos a leer las siguientesreacciones bioquímicas:
• Fermentación de la glucosa (K/A).
• Fermentación de glucosa, lactosa y sacarosa (A/A)
• No fermentación de los carbohidratos (K/K), la bacteria no utiliza los hidratos de carbono, produciendo aminas que alcalinizan el fondo y la superficie del medio.
Producción de gas: ruptura del medio.
• Producción de H2S: ennegrecimiento del medio

CALDO DECULTIVO RM-VP
1. RM: fermenta la glucosa o no fermenta
2. VP: Presencia de acetina o su ausencia
Lectura
Se efectúa luego de 24 horas de incubación a una temperatura de 35-36C.
MR +: rojo= fermenta carbohidratos
MR -: amarillo no fermenta carbohidratos
VP +: precipitado rojo, contiene precipitina
VP –: precipitado amarillo, no hay acetina.
b) PRUEBA DEL INDOL
La prueba del indol esuna prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con frecuencia triptofanasa.

Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la molécula intermediariaácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol, ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía. Como coenzima de la reacción se requiere al fosfato de piridoxal.
Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo bacteriano. Dichaliberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el enzima triptofanasa.Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona con NaCl al 0,5% (la triptona presenta abundante triptófano). Para la posterior detección del indol se usa el reactivo de Kovacs que se puede preparar con los siguientes ingredientes: * Alcohol amílico oisoamílico (puede sustituirse por alc.butílico)........150ml * p-dimetilamino-benzaldehído..........................................................10g * HCl (concentrado).........................................................................50mlSe disuelve primero el aldehído en el alcohol y después se agrega lentamente a esta mezcla el ácido. Para el control de calidad del reactivo sepueden utilizar cultivos conocidos. Las más convenientes son Escherichia coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al añadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs, se producirá un anillo de color rojo en la superficie del caldo y la prueba será considerada positiva. Si esto ocurre después de 24 horas, la prueba se considera completa, perosi es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porción de unos 2ml que se retira de él asépticamente. |
 AGAR SIM

Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo.
Es útil para diferenciar miembros de la familia...
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