Pruebas bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS

Introducción:

Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo yque la bacteria al crecer incorpora o no.

En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para verlos cambios químicos que hayan ocurrido.

Hidrólisis del Almidón

El almidón es producido principalmente por plantas superiores, está compuesto de amilosa y amilopectina.Diversas enzimas amilolíticas hidrolizan almidón y sus productos

Agar Almidón

← Sustrato: Almidón (polímero de glucosa).

← Enzima: Amilasa (exoenzima).

← Producto: Glucosa.

← Revelador: Lugol.

← El lugol con el almidón forman un complejo color café-púrpura

← que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.

[pic]P. Negativa P. Positiva

Degradación de la caseína

Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.

Agar Leche Descremada

← Sustrato: Caseína(proteína).

← Enzima: Caseinasa (Proteasa,

← exoenzima).

← Producto: Aminoácidos.

← Revelador: No requiere.

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Hidrólisis de la lecitina y reducción del telurito

Algunos microorganismos producen lecitinasa que hidroliza la lecitina (fosfolípido). Se utiliza el agar yema de huevo. Las colonias productoras de lecitinasa forman una zona opaca a su alrededor. Elmedio de Baird Parker es empleado para el aislamiento y cuantificación de estafilococos cuagulasa positivos, al que se adicionan componentes que lo hacen selectivo. Las colonias típicas de S. aureus son oscuras por la reducción del telurito, además presentan el halo de hidrólisis de la lecitina.

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Licuefacción de la gelatina

La gelatina es una proteína que tiene la capacidad degelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la componen pierde su característica de gelificar. Se pueden emplear varios medios que permiten la visualización macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado.

Gelatina Nutritiva

← Sustrato: Gelatina (proteína).

← Enzima: Gelatinasa (Proteasa, exoenzima).

← Producto: Aminoácidos.

←Revelador: No requiere o puede emplearse el carbón activado en polvo.

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Fermentación de carbohidratos

Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados, algunos requieren de ser degradados en monómeros y transportados a la célula para posteriormente en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía fermentativa. La fermentación (degradación) de uncompuesto orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formación de gas capturado en la campana de fermentación.

Medio base rojo de fenol más carbohidrato o polialcohol, con campana de fermentación (Durham).

← Sustrato: Carbohidrato o polialcohol.

← Vía: Fermentativa.

← Producto: Ácidos orgánicos.

← Indicador: Cualquier indicador de pH.[pic]

Oxidación/Fermentación

Las bacterias utilizan hidratos de carbono por uno de dos procesos metabólicos, fermentativo u oxidativo. La principal diferencia es la necesidad de oxígeno atmosférico y una fosforilación inicial. Por prueba se inoculan dos tubos de medio y uno de ellos se sella con aceite mineral o parafina para impedir la entrada de oxígeno. La fermentación requiere de...