pruebas diferenciales para bacilos

PRUEBAS DIFERENCIALES PARA BACILOS GRAM NEGATIVOS

Después de realizar el cultivo bacteriano se debe proceder al diagnóstico del microorganismo a través de las pruebas diferenciales. Estas pruebas ponen de manifiesto las propiedades bioquímicas de las bacterias, para ello el MO debe estar puro. Las pruebas diferenciales para Bacilos Gram Negativos comprenden los siguientes medios decultivo:

1. Citrato de Simmons
Tipo de medio:
Sólido, agar tendido. Contiene citrato de sodio y amonio y como indicador azul de bromotimol. Es un medio pobre donde se desarrollan MO no exigentes
Forma de actuación:
La utilización del citrato produce una alcalinización del medio de cultivo, lo que se manifiesta por el viraje del indicador de pH.
Empleo e interpretación de resultados:
Sesiembra por estría en la superficie del medio de cultivo, se incuba de 24-48 hrs. A 35ºC.
Reacción positiva: medio de cultivo azul
Reacción negativa medio de cultivo verde (sin cambio)

2. TSI (Triple-Azúcar-Hierro)
Tipo de medio:
Sólido, agar profundo y semitendido. Contiene tres azúcares: glucosa, sacarosa y lactosa. Además sulfato ferroso y comoindicador rojo de fenol.
Forma de actuación:
Se realizan tres pruebas a la vez:
a) Utilización de azúcares: glucosa, sacarosa, lactosa.
b) Producción de gas
c) Producción de ácido sulfhídrico.
Cuando el MO utiliza como fuente primaria de carbono los azúcares, se acidifica el medio, porque se forman ácidos orgánicos. Se observan por cambio de color del medio de cultivo. Aparecen dos partes enel tubo, la superficial, en la zona inclinada (lactosa y sacarosa) y la interior en el fondo (glucosa).
El gas se produce debido a la formación de hidrógeno y de anhídrido carbónico.
El tiosulfato es reducido por algunos MO a ácido sulfihidrico H2S, el cual reacciona con la sal férrica produciendo sulfuro de hierro que se observa como un precipitado de color negro.
Empleo e interpretación deresultados:
Se siembra desde un cultivo puro en estría de superficie inclinada y en profundidad. Se incuba por 24-48 hrs. a 35ºC.
Fermentación de los tres azúcares: amarillo
Fermentación de glucosa: fondo amarillo, tendido naranja
H2S : precipitado negro
Formación de gas: burbujas, agrietamiento o desplazamiento del medio
3. LIA (Lisina-Hierro-Agar)
Tipo de medio:
Sólido, agar enprofundo y semitendido. Contiene lisina, hierro y glucosa. Se observa descarboxilación y desaminación de la lisina. Indicador púrpura de bromocresol.

Forma de actuación:
Las descarboxilasas son enzimas que actúan sobre el grupo carboxilo de los aminoácidos, para formar aminas y se desprende CO2, este proceso se realiza en anaerobiosis.
En este medio la lisina es descarboxilada por la lisinadescarboxilasa, lo que produce viraje del indicador de pH, por alcalinización, con lo que el color amarillo pasa a púrpura.
Además el medio contiene glucosa, al producirse la fermentación, desciende el pH, el medio se acidifica.
Existen ciertos MO (géneros Proteus y Providence) que desaminan la lisina a ácido acetocarbónico, este con el Fe y en presencia de oxígeno da un color pardo rojizo enla parte inclinada del medio. También se puede observar producción de ácido sulfihidríco.
Empleo e interpretación de resultados:
El MO se siembra en estría y profundidad. Se incuba por 24-48 hrs. a 35ºC.
Descarboxilación de la lisina positiva: tubo color púrpura intenso
Descarboxilación de la lisina negativa: fondo amarillo
Desaminación de la Lisina: tendido rojo opardo rojizo

4. MIO (Movilidad-Indol-Ornitina)
Tipo de medio: Medio semisólido, agar profundo. Contiene glucosa, ornitina, un dador de triptofano y como indicador púrpura de bromocresol. Se realizan tres pruebas a la vez:
a) Se observa movilidad
b) Producción de Indol
c) Descarboxilación de la ornitina.

Forma de actuación:
Si el MO posee la enzima descarboxilasa se produce la...