Purificacion y cuantificacion de proteinas

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA
ESCUELA DE QUÍMICA
PROGRAMA DE QUÍMICA INDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA.


SESIÓN # 4:
PURIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS.


OBJETIVOS:

-Extraer las proteínas presentes en la espinaca.
- Preparar la curva patrón empleando una proteína patrón, que generalmente suele ser la seroalbúmina bovina (SBA).
- Cuantificar las proteínasmediante el método de Bradford.

INTRODUCCIÓN:
La mayor parte de las investigaciones bioquímicas requieren la purificación, al menos parcial, de las sustancias objeto de estudio. Esto requieregeneralmente un esfuerzo ya que una célula contiene miles de sustancias diferentes y la molécula deseada puede ser extremamente inestable o encontrarse a concentraciones muy bajas.

Métodos de ruptura celulary extracción de proteínas:
El primer paso en el aislamiento de una proteína es la ruptura celular, para posteriormente poder extraer la proteína con un tampón adecuado. El método de ruptura aelegir depende de las características mecánicas del tejido o células de donde se va a aislar la proteína, así como de su localización. Entre los distintos métodos están:

a. Lisis Celular: Válido paracélulas sin pared celular como las células de tejidos animales, pero no es suficiente para células vegetales o bacterias. consiste en suspender las células en una solución hipotónica (más diluida que elinterior celular). Debido a la diferencia osmótica el agua difunde al interior de la célula, causando su hinchamiento y rotura.

b. Destrucción Mecánica: Entre estos métodos se encuentran laHomogenización (hacer pasar las células entre un tubo y un pistón de vidrio que ajustan casi totalmente); moler en un Mortero con arena; Molino con perlas de vidrio; la Prensa de French (que hace pasar lascélulas a gran velocidad a través de un pequeño orificio), la Sonicación (someter las células a vibraciones de ultrasonido).



c. Congelación – Descongelación: La rotura se produce al someter...