química Organica

 EXTRACCION E IDENTIFICACION QUIMICA DE ADN
FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN,permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células y el nucleo celular mediante fuerza física en un mortero y luego con NaCl 2N, en la que sedisuelve el ADN. En ese momento, la solucion contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, degran longitud, se habrán emulsionado y fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa solución, para lo cual se utilizaalcohol etílico frio, en la cual el ADN es insoluble, pudiéndose observar en la interface unos filamentos que corresponden a este.

MATERIAL Y REACTIVOS
Muestra animal o vegetal
Agua destilada
NaCl2N
Detergente líquido o champú
Alcohol etilico 96 a 0ºC
Bano maria a 60oC
Mortero
Embudo
Beaker 250 ml
Gasa
Varilla de vidrio
HCl 1N
Reactivo de Schiff
REALIZACIÓN
1. Elegir la muestraque va a proporcionar el ADN y cortarla en cuadraditos.
2. Triturar la muestra con un poco de agua en el mortero y completar con 50 ml de agua. Filtrar con una gasa. Así se romperán muchas células yotras quedarán expuestas a la acción del detergente.
3. Mezclar en un recipiente limpio 50 ml del triturado celular con 50 ml de NaCla 2 N y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos.Terminando de romper las células y la membrana nuclear para liberar el ADN.
4. Añadir 50 ml e etanol enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendoéste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.
5. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y la solucion. Remover la varilla...