Reconocimiento de carbohidratos

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
(PRACTICA N 2)


1. Prueba de Benedict.-
Algunos azúcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta característica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azúcares con un grupo carbonilo libre son llamados azúcaresreductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unión glicosídica se conocen como azúcares no reductores. Existen varias reacciones químicas que permiten determinar si se está en presencia de un azúcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reacción o no de un azúcar con el ion Cu2+.
El reactivo de Benedict contienesoluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solución un pH alcalino necesario para que la reacción pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion Cu2+ en solución ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le agrega alreactivo una solución de azúcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullición, el azúcar en solución alcalina a elevadas temperaturas se convertirá en D-gluconato y su ene-diol, rompiéndose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos, reaccionarán con el Cu++. Se obtiene entonces un azúcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producidoreacciona con los iones OH- presentes en la solución para formar el hidróxido de cobre:
Cu + + OH - → Cu(OH) (precipitado amarillo)
El hidróxido pierde agua
2Cu(OH) → Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O
La aparición de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azúcar reductor.

Materiales y reactivos

1.- Reactivo de Benedict: consta de 3soluciones:
- Pesar 100 g de NaCO3 anhidro y disolver en 200 ml de agua destilada hervida.
- Pesar 173 g citrato de sodio y disolverlo en 200 ml de agua destilada hervida.
- Pesar 17.3 g de CuSO4.5H2O y disolverlo en 300 ml de agua destilada hervida.
Mezclar las tres soluciones cuando estén frías. Aforar a 1 l con agua destilada hervida.
-Soluciones de carbohidratos 0.1 mol/l. Pesar lacantidad requerida de cada uno de los carbohidratos a ensayar y disolverlos en 100 ml de agua destilada. La solución de almidón se prepara al 1%: pesar 1 g de almidón y llevar a 100 ml con agua destilada caliente.

-1 gradilla con tubos de ensayo
-pipetas de varios volúmenes
-baño maría en ebullición

Procedimiento

Seleccione la pipeta más conveniente y deposite 2.5 ml de reactivo deBenedict en un tubo de ensayo mediano (los tubos de ensayo grandes se usan en la prueba de hidrólisis del almidón). Repita este paso en 6 tubos más. Luego, a cada tubo, añada 6 gotas de una y solo una de las siguientes soluciones de carbohidratos: glucosa, galactosa, lactosa, xilosa, fructosa, sacarosa al 0.1M y almidón al 1% según el siguiente cuadro:

Nombre del tubo | Reactivo de Benedict (ml) |Carbohidrato (gotas) | Color de Rxn. |
Glucosa | 1ml | 6 | Marrón débil. |
Galactosa | 1ml | 6 | ---- |
Lactosa | 1ml | 6 | Marrón fuerte |
Xilosa | 1ml | 6 | ---- |
Fructosa | 1ml | 6 | Marrón semi- fuerte |
Sacarosa(*) | 1ml | 6 | Celeste claro(*)/Marrón |
Almidón | 1ml| 6 | Celeste claro |
(*) Se requiere digestión con HCL al 10%.

Coloque los tubos en un baño de agua hirviendo por 5 minutos. Tenga cuidado de no quemarse. Observe cualquier cambio de color durante el calentamiento. Saque el tubo y póngalo en una gradilla y después de un corto tiempo observe si se ha formado un precipitado, el cual puede ser rojo, anaranjado o verdoso....