Reporte
Páginas: 7 (1624 palabras)
Publicado: 22 de febrero de 2011
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
Introducción:
Los métodos serológicos están basados en la reacción antígeno-anticuerpo. El suero sanguíneo es portador de anticuerpo y antígenos, por lo que es útil para aplicar distintos métodos diagnósticos1. Entre las pruebas serológicas están las reacciones de precipitación, que implican un antígeno soluble y al ponerla en una solución del mismo, en contactocon sus anticuerpos específicos se forman complejos Ag-Ac que al insolubilizarse en su mayor parte, dan una reacción de precipitación2. Después los complejos se agregan formando micelas o redes que alcanzan determinado tamaño y precipitan, zona de equvalencia2.
Existen distintos tipos de reacciones de precipitación, entre las cuales se encuentra el método de Mancini o difusión radial, que esuna técnica que determina cuantitativamente la concentración del antígeno, ya que la difusión radial del antígeno produce un anillo de precipitación, cuyo diámetro al cuadrado corresponde a la concentración del antígeno. Otro método en el que se da una reacción de precipitación es en el método de difusión radial doble, en el que los dos reactantes (Ag y Ac) difunden radialmente hasta alanzar lazona de equilibrio y precipitan3,.
Las reacciones de precipitación de las pruebas serológicas se caracterizan por la especificidad y sensibilidad4.
EL VDRL, es una prueba serológica realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis; mide los anticuerpos que pueden ser producidos por el Treponema pallidum, la bacteria causante de esta enfermedad,sin embargo no es una prueba diagnóstica como tal5.
Diagrama de Flujo:
Inmunodifusión doble:
Colocar en el centro el antígeno y en los posos del alrededor el suero de los pacientes
Abrir agujeros en la lámina e identificar los posos
Preparar lámina con 3% de agarosa , dejar secar por 5 minutos
Observar las bandas formadas entre los posos.
Colocar la placa dentro de una cámara húmeday dejar reposar 24 horas.
Prueba de VDRL:
Con la pipeta colocar una gota de la muestra y una de control
Tomar la placa e identificar los pozos como muestra y control positivo.
Colocar una gota de reactivo en cada pozo.
Observar al microscopio (10x)
Mover placa suavemente
Resultados:
Discusión:
Las reacciones de precipitación se dan por la formación de complejos inmunes(Ag-Ac) los cuales al insolubilizarse forman un precipitado; esto se da cuando las proporciones de antígenos y anticuerpos de la mezcla es equivalente1.
En la práctica se utilizó la técnica de doble difusión radial (Ouchterlony), utilizando una muestra de suero sanguíneo de un paciente x; ésta técnica se basa en el principio de la difusión de proteínas a través de un medio semisólido como el agar.3Esta es una prueba cualitativa y cuantitativa, en la cual ambos reactantes (Ag y Ac) difunden radialmente uno hacia el otro; cuando ambos se encuentran, se forma la zona de equivalencia, en la que el complejo Ag-Ac correspondiente se hace visible en formando una línea de precipitación4. Se forman tantas bandas de precipitación como Ag-Ac se tenga en la muestra.
En este caso en el gel serealizan pocillos opuestos que se rellenan con Ag y Ac. Una vez realizada esta operación se deja el gel en una cámara húmeda por 18 a 48 horas para que puedan difundir a través de él; por cuestiones de tiempo no se pudo observar dichas bandas.
Cuando la cantidad de Ag es óptima respecto a la cantidad de Ac, se está en la zona de equivalencia y la línea de precipitación quedará a la mismadistancia de cada pocillo. Cuando la línea de precipitación se cierra y acerca al pocillo del anticuerpo, ello significa un exceso de antígeno (post-zona) mientras que cuando ocurre lo contrario se trata de un exceso de anticuerpo (prozona)4.
La formación de inmunocomplejos se ve influida por variables como pH, temperatura, fuerza iónica del medio y características propias del anticuerpo como la...
Introducción:
Los métodos serológicos están basados en la reacción antígeno-anticuerpo. El suero sanguíneo es portador de anticuerpo y antígenos, por lo que es útil para aplicar distintos métodos diagnósticos1. Entre las pruebas serológicas están las reacciones de precipitación, que implican un antígeno soluble y al ponerla en una solución del mismo, en contactocon sus anticuerpos específicos se forman complejos Ag-Ac que al insolubilizarse en su mayor parte, dan una reacción de precipitación2. Después los complejos se agregan formando micelas o redes que alcanzan determinado tamaño y precipitan, zona de equvalencia2.
Existen distintos tipos de reacciones de precipitación, entre las cuales se encuentra el método de Mancini o difusión radial, que esuna técnica que determina cuantitativamente la concentración del antígeno, ya que la difusión radial del antígeno produce un anillo de precipitación, cuyo diámetro al cuadrado corresponde a la concentración del antígeno. Otro método en el que se da una reacción de precipitación es en el método de difusión radial doble, en el que los dos reactantes (Ag y Ac) difunden radialmente hasta alanzar lazona de equilibrio y precipitan3,.
Las reacciones de precipitación de las pruebas serológicas se caracterizan por la especificidad y sensibilidad4.
EL VDRL, es una prueba serológica realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sífilis; mide los anticuerpos que pueden ser producidos por el Treponema pallidum, la bacteria causante de esta enfermedad,sin embargo no es una prueba diagnóstica como tal5.
Diagrama de Flujo:
Inmunodifusión doble:
Colocar en el centro el antígeno y en los posos del alrededor el suero de los pacientes
Abrir agujeros en la lámina e identificar los posos
Preparar lámina con 3% de agarosa , dejar secar por 5 minutos
Observar las bandas formadas entre los posos.
Colocar la placa dentro de una cámara húmeday dejar reposar 24 horas.
Prueba de VDRL:
Con la pipeta colocar una gota de la muestra y una de control
Tomar la placa e identificar los pozos como muestra y control positivo.
Colocar una gota de reactivo en cada pozo.
Observar al microscopio (10x)
Mover placa suavemente
Resultados:
Discusión:
Las reacciones de precipitación se dan por la formación de complejos inmunes(Ag-Ac) los cuales al insolubilizarse forman un precipitado; esto se da cuando las proporciones de antígenos y anticuerpos de la mezcla es equivalente1.
En la práctica se utilizó la técnica de doble difusión radial (Ouchterlony), utilizando una muestra de suero sanguíneo de un paciente x; ésta técnica se basa en el principio de la difusión de proteínas a través de un medio semisólido como el agar.3Esta es una prueba cualitativa y cuantitativa, en la cual ambos reactantes (Ag y Ac) difunden radialmente uno hacia el otro; cuando ambos se encuentran, se forma la zona de equivalencia, en la que el complejo Ag-Ac correspondiente se hace visible en formando una línea de precipitación4. Se forman tantas bandas de precipitación como Ag-Ac se tenga en la muestra.
En este caso en el gel serealizan pocillos opuestos que se rellenan con Ag y Ac. Una vez realizada esta operación se deja el gel en una cámara húmeda por 18 a 48 horas para que puedan difundir a través de él; por cuestiones de tiempo no se pudo observar dichas bandas.
Cuando la cantidad de Ag es óptima respecto a la cantidad de Ac, se está en la zona de equivalencia y la línea de precipitación quedará a la mismadistancia de cada pocillo. Cuando la línea de precipitación se cierra y acerca al pocillo del anticuerpo, ello significa un exceso de antígeno (post-zona) mientras que cuando ocurre lo contrario se trata de un exceso de anticuerpo (prozona)4.
La formación de inmunocomplejos se ve influida por variables como pH, temperatura, fuerza iónica del medio y características propias del anticuerpo como la...
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