SANGER

ALUMNO: BERNAL CARREÓN FRANCISCO ANTONIO GRUPO: 3IM1 SECCIÓN: 4
INTRODUCCIÓN.
La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación. Existen variasmaneras de determinar la secuencia de aminoácidos. El primero en lograr esto fue Frederick Sanger, quién diseño un método, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso de DNFB. Estecompuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionará con los grupos imidazol,fenólicos y epsilonamino, por lo que se dará una dinitrofenilación en la cadena lateral de la tirosina, histidina y lisina. Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura totalde los enlaces peptídicos lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más difícil de romper. Los DNP deaminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aa’s libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar. Estos DNP son sometidos acromatografía, y se determina al aminoácido amino terminal de la proteína en comparación con otros DNP derivados. Edman utilizó una técnica similar a la de Sanger, utilizando el fenilisotiocianato para marcaral grupo amino del aa terminal, a diferencia de Sanger, al hidrolizar la proteína únicamente rompía el enlace entre el aa terminal y el resto de la de la cadena, la cual


permanecía intacta, por loque la secuenciación se facilita.
OBJETIVOS.
Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina mediante el método de Sanger.
DESARROLLO.
Se colocaron 30 mg dehemoglobina en un tubo y se disolvió con bicarbonato de sodio al 4.2%, esto debido a que la reacción con el DNFB se lleva a cabo en condiciones ligeramente básicas. Después de esto se agregó al tubo...