Seldi tof

http://www.medmol.es/tecnicas/14/

Resumen

SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption Ionization Time Of Flight Mass Spectrometry) Espectrometría de Masas en `Tiempo de Vuelo` mediante Desorción-Ionización por Láser de Superficie. SELDI-TOF-MS es una técnica de proteómica que utiliza láser de superficie y espectrometría de masas para analizar mezclas complejas de proteínas. Es un métodode detección de proteínas rápido, reproducible y fiable. En medicina se utiliza para medir niveles de proteínas en muestras de tejidos, sangre, orina y otras muestras de pacientes. Se está aplicando en el diagnóstico precoz del cáncer.

Concepto

En esta técnica la mezcla de proteínas se coloca sobre una superficie modificada capaz de unir la proteína a detectar. Esa capacidad puede tenerlala superficie en sí, que puede estar químicamente activada para obtener la adsorción necesaria o, en otros casos, para obtener uniones específicas pueden usarse como moléculas capturadoras ADN, anticuerpos u otras proteínas con capacidad de unir la proteína a detectar. El lavado libera las proteínas que se unen a la superficie de forma inespecífica. Se aplica un tratamiento con EAM (energyabsorbing molecules) que hace posible la posterior acción de desabsorción e ionización del laser. Se analiza el “Tiempo de vuelo” en el que se mide el tiempo que cada proteína ionizada tarda en alcanzar el extremo del tubo. Este tiempo depende de la masa de la proteína. El espectrómetro de masas nos permite aproximar la masa de la proteína a detectar. La tecnología SELDI fue desarrollada por T. WilliamHutchens en el Baylor College of Medicine en 1993. La diferencia de niveles de determinadas proteínas entre pacientes con una enfermedad dada frente a pacientes que no la padecen puede servirnos como marcador diagnóstico. Así por ejemplo esta técnica se está usando para identificar proteínas implicadas en las etapas iniciales de la progresión tumoral buscando marcadores para diagnóstico precoz ydetección de metástasis.

paper de cáncer: http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B83W2-4WRM56T-4&_user=10&_coverDate=03%2F31%2F2006&_alid=1271841039&_rdoc=1&_fmt=high&_orig=search&_cdi=33774&_sort=r&_docanchor=&view=c&_ct=1565&_acct=C000050221&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=adfd98856f67f637022677ec6d51f7a9http://www.amgen.es/es/corporativo2002/LIBRO%20BIOTECNOLOGIA%202.pdf

A) Perfiles proteicos de plasma o suero
Se lleva a cabo analizando el suero/plasma de los pacientes con la patología objeto de estudio (cardiovascular, neurodegenerativa, infecciosas, cáncer, etc.) y alternativamente en otros líquidos fisiológicos (lavado broncoalveolar, líquido cefalorraquído, orina). Se utiliza la técnica denominada SELDI-TOF (Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization-Time of Flight) para la generación de los perfiles proteicos, que combina la retención de las proteínas del suero en
biochips con la determinación de sus masas moleculares mediante MS, permitiendo generar gráficos donde se representa la abundancia frente a la masa molecular de las proteínas, a modo de código de barras proteicos constituidos por miles de líneas que caracterizan el suero decada individuo (Figura 5). La comparación de los perfiles normales (individuos sanos) con los obtenidos del suero de pacientes con distintas patologías (se está utilizando en cáncer y en patologías cardiovasculares, neurodegenerativas, osteoarticulares, respiratorias, infecciosas...) permite obtener perfiles pronósticos, diagnósticos, de seguimiento, de tratamiento farmacológico, etc. Su poderdiscriminatorio es muy superior al de marcadores únicos con los que se han comparado (por ejemplo, PSA en cáncer de próstata, proteína C reactiva en infección e inflamación). Como el análisis mediante SELDI-TOF utiliza muy poca muestra (1 μl) y, además, es muy rápido (se pueden analizar cientos de muestras al día) y automatizado, su potencial en clínica analítica es enorme y puede ir sustituyendo...