Seminario

Seminario Nº 3B




TÉCNICAS ANALÍTICAS BÁSICAS EN FISIOLOGÍA VEGETAL








Contenido hídrico

Para saber el agua que contiene una planta se usa una técnica muy sencilla que consiste en dos mediciones consecutivas del peso de la planta en distintas condiciones. La primera, Peso fresco, consiste en el pesado de la planta intacta u órgano que se desee cuantificar. Se tara labáscula con la porción de papel necesaria pesándose a continuación el material de estudio. La segunda medida, Peso seco consiste en pesar la planta en cuestión tras mantenerla en estufa a 60-70º C hasta peso constante. La diferencia entre ambas medidas nos informará sobre el contenido hídrico de la planta.


Determinación de pigmentos fotosintéticos

La fotosíntesis, proceso que permite a losvegetales obtener la materia y la energía que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jóvenes de pigmentos, capaces de captar la energía lumínica.
Entre los distintos métodos que existen para separar y obtener esos pigmentos se encuentra el de la cromatografía, que es una técnica que permite la separación de las sustanciasde una mezcla y que tienen una afinidad diferente por el disolvente en que se encuentran. De tal manera que al introducir una tira de papel en esa mezcla el disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos según la solubilidad que tengan y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente según su color.
 
|PIGMENTO |COLOR ||Clorofila A |Verde azulado |
|Clorofila B |Verde amarillento |
|Carotenos |Naranja |
|Xantofilas |Amarillo |


La técnica que se describe a continuación se puede realizar sin ningún problema en casa.
Materialnecesario.
Hojas de espinaca o de cualquier planta cortadas en porciones.
Alcohol de 96º (sirve el que utilizamos para desinfectar las heridas)
Un mortero
Dos filtros de café
Un embudo
Un vaso
Una pinza de la ropa
[pic][pic][pic][pic][pic]
¿Cómo lo hacemos?
Se coloca en el mortero las hojas que se hayan elegido, se añade un poco de alcohol y se trituran hasta que el alcohol adquiera un tinteverde intenso.
Se filtra el líquido utilizando el embudo en el que se ha puesto el filtro de café.
Se recortan unas tiras de papel del otro filtro y se introducen en el vaso hasta que toquen su fondo procurando que se mantengan verticales con la ayuda de la pinza
Se esperan 30 minutos y aparecerán en la parte superior de la tira de papel unas bandas de colores que señalan a los distintospigmentos.


OTROS MÉTODOS

Medida de pigmentos fotosintéticos en Dunaniella viridis
Extracción de acetona a partir de precipitados y medida espectrofotométrica.
Materiales:
• Espectrofotómetro
• Centrífuga de mesa
• tubos
• acetona
Método de extracción y medida
1. Tomar 5ml de muestra y centrifugar durante 5min
2. Guardar sobrenadante para medir fosfato con método verde malaquita
3.Resuspender el precipitado en 4ml de acetona para extraer pigmentos
4. Mezclar y enrasar a 5ml con H2O destilada
5. Centrifugar 1min
6. Medir la absorbancia del sobrenadante resultante
7. Posibles resultados:
-750nm turbidez
-664nm máximo de absorción de la clorofila A
-480nm máximo de absorción de pigmentos carotenoides
8. Cálculos:
-para clorofila A: multiplicar resultados por factor de10,3 (mg /ml)
-para carotenoides: multiplicar por factor de 10 (mg /ml)
Otro método para la extracción de pigmentos es el que se describe a continuación:
• Materiales
1 Mortero
1 Embudo de Buchner
1 Matraz de filtración
1 Matraz aforado de 50 ml
Probeta de 100 ml
Vaso de precipitados de 200ml.
Tubos de ensayo
1 Pipeta de 5ml.
1 Embudo
Pipeta pasteur, mechero, tripie y rejilla...