Succinato Deshidrogenasa

Para determinar el efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento de Escherichia coli es necesario crecer células en medio Sypher Strauss adicionado con succinato y en un medioSypher Strauss adicionado con glucosa. Para comenzar el análisis, se debe partir de un cultivo axénico de Escherichia coli, del cual se toman asadas y se inoculan en los medios antesmencionados; después del periodo de incubación, se cosechan las células y se obtiene la suspensión celular. A cada una de estas suspensiones se les adiciona, por separado glucosa y succinato,obteniéndose los siguientes sistemas:
1. Succinato + Succinato
2. Succinato + Glucosa
3. Glucosa + Succinato
4. Glucosa + Glucosa
A partir de los sistemas antes mencionado, se determina laabsorbancia a 600 de cada uno de los sistemas al inicio del experimento y tras un periodo de incubación de 5 horas, con la finalidad de evaluar el efecto de la fuente de carbono sobre elcrecimiento de Escherichia coli.
Por otro lado, a partir de los sistemas anteriormente mencionados, se lleva a cabo la determinación de la actividad de Succinato Deshidrogenasa, esto paradeterminar el efecto de la fuente de energía sobre la síntesis de la enzima en Escherichia coli. De cada uno de los sistemas preparados con anterioridad, se realizarán diferentes ensayossegún el método descrito por Hatefi y Sigall (1978): en diferentes tubos de lectura, se adicionan 2, 6-diclorofenol indofenol, metosulfato de fenazina, cianuro de potasio, succinato desodio, suspensión celular, proveniente de los diferentes sistemas preparados con anterioridad (la cual va a actuar como fuente de la enzima) y regulador de fosfatos (para completar el volumende reacción).
Los diferentes ensayos, se leerán a al espectrofotómetro a un %T de 600 nm contra un blanco de regulador de fosfatos, tomándose lecturas cada minuto, durante 10 min