Succinato deshidrogenasa

pa INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Determinación de Actividad de Succinato Deshidrogenasa en Escherichia coli


Alumnos:
Miranda Bonilla Jesús
Portillo Aguilar Alain Rodrigo
Sánchez Cruz Francisco Javier
Villanueva Ramirez Jorge Daniel

Laboratorio de Fisiología y Bioquímica Microbiana

6QV1

Equipo 4 Sección 1

Entrega: Marzo / 15 /2011
Determinación de Actividad de Succinato Deshidrogenasa en Escherichia coli

Hipótesis de trabajo

* Si al emplear succinato como fuente de carbono en el desarrollo de E.coli, se induce la síntesis de la succinato deshidrogenasa, mientras que la glucosa la reprime; la medición de la actividad de dicha enzima en cultivos desarrollados con succinato será mayor que aquellosdesarrollados con glucosa.

Diseño experimental

Para la determinación de la actividad de la Succinato deshidrogenasa se diseñó una cadena artificial de electrones con los reactivos que se utilizaron en la práctica; y dicha cadena funciona de la siguiente forma:

El cianuro de potasio (KCN) inhibe la cadena de electrones que usan las bacterias en condiciones normales por medio de los citocromos en sumembrana celular1; por lo tanto el el metosulfato de fenazina (MSF) en su forma oxidada (amarillo) sería el aceptor artificial de electrones y pasaría a un estado reducido incoloro.

Por último la forma reducida del MSF pasaría los electrones a la forma oxidada del 2,6-diclofenol indofenol (2,6-DCPIP) de color azul y por medio de esta acción se reduciría hasta ser incoloro.

ResultadosRegistro de datos

1. Preparación de la suspensión celular.
Tabla 1. Preparación de la suspensión celular
Inóculo de células crecidas en: | Cultivos para medir crecimiento y actividades enzimáticas |
| Matraces con medio base | Fuente de C adicionada |
Succinato | 1 | Succinato (0.5%) |
| 2 | Glucosa (1%) |
Glucosa | 3 | Succinato (0.5%) |
| 4 | Glucosa (1%) |

2.Resultados obtenidos
Tabla 2. Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E. coli.
Cultivos previos en: | Matraces con medio base | Fuente de C | Crecimiento (Absorbancia a 600 nm) |
| | | Inicial | Final | Diferencia |
Succinato | 1 | Succinato | 0.846 | 1.191 | 0.345 |
| 2 | Glucosa | 0.947 | 1.260 | 0.313 |
Glucosa | 3 | Succinato | 0.721 | 1.281 | 0.490 |
| 4 | Glucosa |0.942 | 1.201 | 0.259 |

Tabla 3. Efecto de la fuente de carbono en la actividad de Succinato deshidrogenasa

Tiempo (seg) | % de transmitancia a 600 nm de las suspensiones celulares crecidas en las fuentes de carbono: |
| 1Succinato -Succinato | 2Succinato - Glucosa | 3Glucosa - Succinato | 4Glucosa - Glucosa |
| PrimeraLectura | Lectura Ajustada | PrimeraLectura | Lectura Ajustada |PrimeraLectura | Lectura Ajustada | PrimeraLectura | Lectura Ajustada |
0 | 33.3 | 0 | 31.3 | 0 | 31.3 | 0 | 50.1 | 0 |
30 | 36.4 | 3.1 | 33.4 | 2.1 | 34.7 | 3.4 | 52.2 | 2.1 |
60 | 39.6 | 6.3 | 35.1 | 3.8 | 37.2 | 5.9 | 53.4 | 3.3 |
90 | 41.4 | 8.1 | 36.6 | 5.3 | 39.1 | 7.8 | 55.5 | 5.4 |
120 | 42.6 | 9.3 | 38.0 | 6.7 | 40.5 | 9.2 | 56.8 | 6.7 |
150 | 43.4 | 10.1 | 39.2 | 7.9 | 41.8 |10.5 | 57.9 | 7.8 |
180 | 44.2 | 10.9 | 40.2 | 8.9 | 43.2 | 11.9 | 58.5 | 8.8 |
210 | 45.0 | 11.7 | 41.0 | 9.7 | 44.4 | 13.1 | 59.0 | 8.9 |
240 | 46.3 | 13.0 | 41.9 | 10.6 | 45.5 | 14.2 | 59.3 | 9.2 |
270 | 46.5 | 13.2 | 42.8 | 11.5 | 46.5 | 15.2 | 59.4 | 9.3 |
300 | 46.8 | 13.5 | 43.7 | 12.4 | 47.3 | 16 | 59.6 | 9.5 |

Manejo de datos

* Cálculos:
Efecto de la fuente de carbonoen el crecimiento de E. coli
La diferencia se calcula haciendo una simple resta entre la lectura final menos la lectura inicial.

Ejemplo de Succinato-Succinato:

Lectura Inicial: 0.846
Lectura Final: 1.191

Diferencia entre las lecturas: 1.191 – 0.846 = 0.345

Efecto de la fuente de carbono en la actividad de Succinato deshidrogenasa

La lectura de porcentaje de transmitancia se...