Detrminacion de la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa

¿Por qué pasa?

La enzima succionato deshidrogenasa forma parte de una serie de reacciones químicas que se llevan a cabo dentro del ciclo de Krebs y tiene como función en la reorganización de moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otrasrutas, por ejemplo en la beta oxidación de los ácidos grasos, tal conversión ocurre mediante tres pasos: una primera oxidación, una hidratación y una segunda oxidación. Estos tres pasos, además de regenerar oxalacetato, permiten la extracción ulterior de energía mediante la formación de FADH2 y NADH.
La primera reacción de oxidación es catalizada por el complejo enzimático de la succinatodeshidrogenasa, la única enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrógeno al FAD en vez de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energía asociada a la reacción no es suficiente para reducir el NAD+.
El complejo enzimático también es el único del ciclo que pasa dentro de la membrana mitocondrial. Tal posición sedebe a la implicación de la enzima en la cadena de transporte de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la cadena gracias a la unión estable entre la enzima y el cofactor mismo.

¿Cómo pasa?
Las reacciones restantes del ciclo oxidan al succinato a oxalacetato, éste al regenerarse, permite otra vuelta del ciclo. La succinato deshidrogenasa cataliza laoxidación estereoespecífica del enlace - CH2 –CH2 – del succinato a doble enlace trans, dando el fumarato.

La enzima succinato deshidrogenasa es la única enzima del ciclo de Krebs que no se encuentra en la matriz mitocondrial, sino que en la membrana mitocondrial interna, con el sitio de unión del sustrato accesible desde la matriz. Es además la única en el ciclo asociada a un grupo prostéticoflavínico (FAD) mediante el cual los equivalentes de reducción del succinato son transferidos a la ubiquinona, componente de la cadena de transporte de electrones. En general la función bioquímica del FAD es oxidar alcanos a alquenos, mientras que el NAD+ oxida alcoholes a aldehídos o cetonas. El malonato es un fuerte inhibidor

Cuando se agrega el fenol al 90% desnaturaliza la enzima y no hayreacción.
Cuando no se agrega fenol al 90% no hay desnaturalización y hay reacción, pues hay cambio de color.
Usando un colorante azul metileno que al cambiar su estado redox pasa coloreado a incoloro o viceversa.
Y el aceite mineral sirve como tapón para no regresar la reacción.

Conceptos:

ENZIMA SUCCINATO DESHIDROGENASA: es una flavoproteína que participa en el ciclo de Krebs y al estarasociada a la membrana interna mitocondrial, también forma parte la cadena de transporte electrónico mitocondrial. La SDH cataliza estereoespecíficamente la deshidrogenación en trans del ácido succínico hasta ácido fumárico. Esta enzima se inhibe por malonato y maleato, que son análogos estructurales del succinato.
Es una Oxidorreductasa que cataliza la oxidación del succinato para formar fumaratosiendo la coenzima el FAD. Se localiza en eucariotes en la membrana mitocondrial interna.

ENZIMA: Proteínas catalizadoras, capaces de acelerar las reacciones químicas en ambos sentidos, sin consumirse en ella, ni formar parte de los productos. La diferencia fundamental es que tienen gran especificidad de reacción o sea por el sustrato sobre el cual actúan.

COENZIMA: Ciertas enzimasrequieren de ciertos compuestos orgánicos, termoestables para poder cumplir con su función catalítica, estas moléculas se denominan coenzimas, generalmente tiene bajo peso molecular y suelen ser claves en el mecanismo catalítico.

FAD: coenzima que interviene como dador o aceptor de electrones y protones (poder reductor) en reacciones metabólicas redox; su estado oxidado (FAD) se reduce a FADH2 al...