Succinato deshidrogenasa

HIPOTESIS:
* La succinato deshidrogenasa es una enzima inducible por lo tanto esperamos que las células que fueron crecidas en succinato como fuente de carbono sean las que tengan una mayor actividad de esta.
* En cuanto a la mejor fuente de carbono esperamos que la mejor sea la glucosa ya que esta entra directamente a glicolisis

OBJETIVOS:
Determinar en que condiciones obtenemosuna mayor actividad de la succinato deshidrogenase así como determinar cual es la mejor fuente de carbono para el crecimiento de la célula.










INTRODUCCION:
La succinato deshidrogenasa, succinato coenzima Q reductasa o complejo II es una flavoproteína ligada a la membrana interna mitocondrial que interviene en el ciclo de Krebs y en la cadena de transporte deelectrones y que contiene FAD (flavín-adenín-dinucleótido) unido covalentemente. Posee un peso molecular de alrededor de 100 kDa, y contiene una molécula de FAD, ocho átomos de hierro y ocho átomos de azufre lábiles frente a los ácidos. El enzima posee dos subunidades, cuyos pesos moleculares son 30 kDa y 70 kDa respectivamente. La subunidad mayor de la succinato deshidrogenasa contiene FAD, cuatro átomosde hierro y cuatro átomos de azufre ácido-lábiles. La subunidad menor es una ferro-sulfuro-proteína que contiene cuatro átomos de hierro y cuatro de azufre ácido-lábiles.
La molécula de FAD del enzima, es el aceptor de electrones de la reacción. En general la función bioquímica del FAD es oxidar los alcanos a alquenos, mientras que el NAD+ oxida los alcoholes a aldehídos o cetonas. Esto esdebido a que la oxidación de un alcano (como el succinato) a un alqueno (como el fumarato) es suficiente exergónica como para reducir el FAD a FADH2, pero no para reducir el NAD+ a NADH. Es poco usual hallar una unión covalente entre el FAD y una proteína; en la mayoría de los casos, el FAD se encuentra unido a su enzima asociado de forma no covalente (unión débil y transitoria). por lo que en estecaso el FAD actúa como grupo prostético y no como un coenzima móvil, como lo hace normalmente.
El FADH2 de la succinato deshidrogenasa, al no poder desprenderse del enzima, debe oxidarse nuevamente in situ. El FADH2 cede sus dos hidrógenos a la ubiquinona (coenzima Q) que se reduce a ubiquinol (QH2) y abandona el enzima, difundiendo en la bicapa lipídica hasta alcanzar en siguiente complejoenzimático de la cadena respiratoria.
La succinato deshidrogenasa actúa separando los átomos de hidrógeno que se hallan en posición trans de los átomos de carbono metilénicos del succinato.
Este enzima posee algunas características de un enzima alostérico: es activada por el succinato, el fosfato, el ATP y el coenzima Q reducido , y es inhibido por el malonato, un análogo estructural del succinato.
Lasuccinato deshidrogenasa es inhibida es decir que impide su síntesis la glucosa por lo que en un medio en el que utilizamos como fuente de carbono la glucosa y como fuente de carbono adicionada la glucosa observamos que obtuvimos la menor actividad ya que la enzima fue inhibida .

Registro y Manejo de Datos:
Tabla 1. Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E.coli
Cultivos previosen: | Matraces con medio base | +fuente de C | Crecimiento (Absorbencia a 600 nm) |
| | | Inicial | Final |
Succinato | 1 | Succinato | 0.725 | 0.934 |
| 2 | Glucosa | 0.815 | 1.252 |
Glucosa | 3 | Succinato | 0.980 | 1.106 |
| 4 | Glucosa | 0.940 | 1.253 |

Tabla 2. Efecto de la fuente de carbono en la actividad de succinato deshidrogenasa
Tiempo(seg) | % de transmitancia a600 nm de las suspensiones celulares crecidas en las fuentes de carbono: |
| 1Succinato-Succinato | 2Succinato-Glucosa | 3Glucosa-Succinato | 4Glucosa-Glucosa |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
30 | 5.2 | 0.5 | 1.1 | 0.1 |
60 | 7.5 | 1.5 | 2.3 | 0.5 |
90 | 9.7 | 2.4 | 4.6 | 0.8 |
120 | 13.2 | 3.4 | 6.0 | 1.2 |
150 | 16.5 | 4.3 | 7.6 | 1.9 |
180 | 19.7 | 5.0 | 10.2 | 2.0 |
210 | 22.7 | 5.9 |...