Síntesis De Lps

UNIVERSITAT DE BARCELONA FACULTAT DE BIOLOGIA DEPARTAMENT DE MICROBIOLOGIA

Tesi doctoral presentada per En/Na

Luis IZQUIERDO LÁZARO

amb el títol

"Biosíntesis del lipopolisacárido de Klebsiella Pneumoniae"

per a l'obtenció del títol de Doctor/a en

BIOLOGIA

Barcelona, 21 de març de 2003

INTRODUCCIÓN........................................................................................1 1.1 El género Klebsiella.............................................................................3 1.2 El lipopolisacárido ...............................................................................9 1.2.1 Importancia biológica ..................................................................9 1.2.2 Estructura química general delLPS...........................................11 1.2.3 Biosíntesis del LPS ....................................................................12 1.2.4 El lípido A ..................................................................................13 1.2.5 El núcleo del LPS.......................................................................20 1.2.6 El antígeno O.............................................................................29 OBJETIVOS ...............................................................................................41 2 MATERIAL Y MÉTODOS....................................................................45 2.1 Cepas Bacterianas ..............................................................................47 2.2 Vectoresutilizados.............................................................................48 2.3 Medios de cultivo...............................................................................49 2.4 Obtención de cepas bacterianas resistentes a la rifampicina .............50 2.5 Estudios con bacteriófagos ................................................................50 2.6 Estudios de la superficie celular........................................................50 2.7 Métodos inmunológicos.....................................................................58 2.8 Obtención de suero no-inmune ..........................................................60 2.9 Adherencia a células uroepiteliales (UEC)........................................60 2.10 Infección del tracto urinario en ratas ...............................................612.11 Dosis letal 50 ...................................................................................61 2.12 Análisis de resistencia a antibióticos ...............................................61 2.13 Técnicas de genética molecular .......................................................62 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................77 3 Clonajey secuenciación de la agrupación génica wbO5 de Klebsiella pneumoniae. Contribución del antígeno O5 a la virulencia....................79 3.1 Precedentes ........................................................................................79 3.2 Clonaje de la agrupación génica wbKpO5 ............................................79 3.3 Secuenciación del clon CosKT4........................................................80 3.4 Análisis de las secuencias de aminoácidos deducidas de las ORFs ..81 3.5 Construcción y caracterización de los mutantes KT769-1 (wbdC) y KT769-6 (wzm-wzt)..........................................................................84 3.6 Contribución del antígeno O5 del LPS a la patogenicidad

de K. pneumoniae KT769...................................................................85 3.7 Discusión ...........................................................................................88 4 Caracterización de la agrupación génica wbO12 de Klebsiella pneumoniae. Estudios de complementación entre mutantes de Serratia marcescens N28b O4- y mutantes de K. pneumoniae O12-. ........................................95 4.1 Precedentes...